常用PCR引物100uL保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯 PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
常用PCR引物100uL保存變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94℃ 20~30 秒,高溫時間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95℃。 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
常用PCR引物100uL保存DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68℃之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C)%含量進(jìn)行推測,一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 低 5℃,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長時間退火沒有必要。
常用PCR引物100uL保存使用方法:
1. 以 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯 PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
Prostaglandin F2α methyl ester (5 mg) 9。alpha。,11。alpha。,15S-trihydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid, methyl ester; PGF2α methyl ester; Prostaglandin F2α methyl ester
Dibutyryl-cGMP (sodium salt) (50 mg) Dibutyryl Guanosine 3’,5’-cyclic monophosphate; N-(1-oxobutyl)-cyclic 3’,5’-(hydrogen phosphate) 2’-butanoate guanosine, monosodium salt
七水流亞鐵(1KG) Ferrous Sulfate, 7H2O, 7782-63-0; ≥99.5%
Metyrapone (1 g) 2-
7(Z),11(Z)-Nonacosadiene (5 mg) (7Z,11Z)-nonacosadiene; 7(Z),11(Z)-Nonacosadiene
Biotinyl-Ala-Ser-Thr-DL-Asp-Fluoromethylketone; Biotinyl-ASTD-Fluoromethylketone Biotinyl-ASTD-FMK
FFA Assay Enzyme Mixture (1 ea) FFA Assay Enzyme Mixture
*標(biāo)記*基化組蛋白H3K27多肽 Biotinylated Trimethyl Histone H3K27 Peptide (200 ul)
Tamoxifen (5 g) 2-[4-[(1Z)-1,2-diphenyl-1-buten-1-yl]phenoxy]-N,N-dimethyl-ethanamine; Tamoxifen
4-fluoro-α-Pyrrolidinopentiophenone (hydrochloride) (10 mg) 4-fluoro-α-2-(1-pyrrolidinyl)-Valerophenone|4-fluoro-α-PVP; 1-(4-fluorophenyl)-2-(1-pyrrolidinyl)-1-pentanone, monohydrochloride
Fluorouracil (25 g) 5-fluoro-2,4(1H,3H)-pyrimidinedione; NSC 19893|Ro 2-9757|U-8953; Fluorouracil
PtdIns--3,5)-P2 -1,2-dioctanoyl) -sodium salt) (5 mg) DOPI-3,5-P2|Phosphatidylinositol-3,5-bisphosphate C-8, PtdIns--3,5)-P2 -1,2-dioctanoyl) -sodium salt), 1-(1,2-dioctanoylphosphatidyl)inositol-3,5-bisphosphate, trisodium salt
Cell-Based Assay Calcein AM (1,000X) (1 ea) Cell-Based Assay Calcein AM (1,000X)
(R)-ketemine (xy7nochloride) (10 mg) (2R)-2-(2-chloropxenyl)-2-(metxylamino)-cyclohexanone, monoxy7nochloride
Amplite Red HRP底物 Amplite Red HRP Substrate
CAY10581 (10 mg) (±)3,4-dixy7no-3-xy7noxy-2,2-dimetxyl-4-[(pxenylmetxyl)amino]-2H-naphtho[2,3-b]pyran-5,10-dione; CAY10581
Palmitoyl N-Isopropylamide (100 mg) N-isopropyl-hexadec*; PIA; Palmitoyl N-Isopropylamide
N1-(4-chloropxenyl)-6-metxyl-N5-[3-(9H-purin-6-yl)-2-pyridinyl]- 1,5-Isoinoneolinediamine B-Raf Inhibitor 1
Bufferedglycerol-SodiumChlorideSolution
鹽*增菌液(SC) Selenite Cystine Broth 用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))
月示胨 Proteose peptone 250 培養(yǎng)基原材料,為營養(yǎng)要求高的細(xì)菌生長提供營養(yǎng)
Bolton肉湯基礎(chǔ)250g/瓶用于彎曲菌選擇性增菌,每培養(yǎng)基中添加070ubationmediaBolton肉湯基礎(chǔ)250g/瓶用于彎曲菌選擇性增菌,每培養(yǎng)基中添加0701
BDSMedium
大腸桿菌顯色培養(yǎng)基CRM002l大腸桿菌顯色培養(yǎng)基用于大腸桿菌的快速檢測和計數(shù)
L-Trptophan L-* Japan 25g incubation media L-Trptophan L-* Japan 25g
靈芝(紅芝,赤芝) 降低糖蜜廢水 支/瓶
鹽胱酸增菌液(SC)20支/包用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)
*酶制備培養(yǎng)基
常用PCR引物100uL保存BLAgarMedium
42℃生長培養(yǎng)基 42℃growth Medium 用于副溶血性弧菌42℃生長試驗(yàn)(SN標(biāo)準(zhǔn))
無菌豬血清 Sterile Defidrinated Pig Blood 100毫升 BR
改良GAM瓊脂基礎(chǔ)250g/瓶用于厭氧菌培養(yǎng),每培養(yǎng)基中添加22可選擇性添加222各ncubationmedia改良GAM瓊脂基礎(chǔ)250g/瓶用于厭氧菌培養(yǎng),每培養(yǎng)基中添加22可選擇性添加222各1支
MI培養(yǎng)基 1000ml 用于濾膜法計數(shù)飲用水中大腸埃希氏菌和大腸菌群