鏈霉菌 PCR Mix 6100 次運(yùn)輸使用方法:
1. 以 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
鏈霉菌 PCR Mix 6100 次運(yùn)輸產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
鏈霉菌 PCR Mix 6100 次運(yùn)輸DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68℃之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C)%含量進(jìn)行推測,一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 低 5℃,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長時(shí)間退火沒有必要。
Prostaglandin F2α methyl ester (10 mg) 9。alpha。,11。alpha。,15S-trihydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid, methyl ester; PGF2α methyl ester; Prostaglandin F2α methyl ester
GMP (sodium salt) (5 mg) Dibutyryl Guanosine 3’,5’-cyclic monophosphate; N-(1-oxobutyl)-cyclic 3’,5’-(hydrogen phosphate) 2’-butanoate guanosine, monosodium salt
二水以兒按四乙酸二鈉(1KG) Na2 EDTA, 2H2O , 6381-92-6; ≥99%
Suc-AAPF-pNA (25 mg) N-(3-carboxy-1-oxopropyl)-L-alanyl-L-alanyl-L-prolyl-N-(4-nitnophenyl)-L-phenylalaninamide; Succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitnoanilide; Suc-AAPF-pNA
7(Z),11(Z)-Nonacosadiene (10 mg) (7Z,11Z)-nonacosadiene; 7(Z),11(Z)-Nonacosadiene
N-[4-[(2R,4R,6S)-4-[[(4,5-Diphenyl-2-oxazolyl)thio]methyl]-6-[4-(hydroxymethyl)phenyl]-1,3-dioxan-2-yl]phenyl]-N’-hydroxyoctanediamide Tubacin
FFA Assay Cofactor Mixture 1 (1 ea) FFA Assay Cofactor Mixture 1
*標(biāo)記*基化組蛋白H3K27多肽 Biotinylated Trimethyl Histone H3K27 Peptide (100 ul)
Tamoxifen (10 g) 2-[4-[(1Z)-1,2-diphenyl-1-buten-1-yl]phenoxy]-N,N-dimethyl-ethanamine; Tamoxifen
4-Fluorobuphedrone (hydrochloride) (50 mg) 4-FBP; 1-(4-fluorophenyl)-2-(methylamino)butan-1-one, monohydrochloride
Fluorouracil (10 g) 5-fluoro-2,4(1H,3H)-pyrimidinedione; NSC 19893|Ro 2-9757|U-8953; Fluorouracil
PtdIns--4,5)-P2 -1,2-dihexanoyl) -sodium salt) (5 mg) DHPI-4,5-P2|Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate C-6, PtdIns--4,5)-P2 -1,2-dihexanoyl) -sodium salt), 1-(1,2-dihexanoylphosphatidyl)inositol-4,5-bisphosphate, trisodium salt
Cell-Based PMA (1 mM) (1 ea) Cell-Based PMA (1 mM)
6-Azidohexanoic Acid (250 mg) Click Tag
2,4-Difluororesorcinol 2,4-Difluororesorcinol
CAY10581 (1 mg) (±)3,4-dixy7no-3-xy7noxy-2,2-dimetxyl-4-[(pxenylmetxyl)amino]-2H-naphtho[2,3-b]pyran-5,10-dione; CAY10581
Palmitoyl N-Isopropylamide (10 mg) N-isopropyl-hexadec*; PIA; Palmitoyl N-Isopropylamide
(S)-8-chloro-2-(pyrrolidin-2-yl)benzofuro[3,2-d]pyrimidin-4(3H)-one BMS-863233 xy7nochloride
改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基250g用于生物制品霉菌無菌檢驗(yàn)
*測定用培養(yǎng)基 100(g) incubation media *測定用培養(yǎng)基 100(g)
明膠培養(yǎng)基 Gelatin Medium 250克 細(xì)菌明膠液化試驗(yàn)
馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)250用于霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)(GB標(biāo)準(zhǔn))incubationmedia馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)250用于霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)(GB標(biāo)準(zhǔn))
低營養(yǎng)V-B培養(yǎng)基(底層) 250g 用于鼠傷寒沙門氏桿菌回復(fù)突變試驗(yàn)(Ames試驗(yàn))
念珠菌顯色培養(yǎng)基l用于白色念珠菌分離和鑒定
溴甲酚紫葡萄糖肉湯 250(g) incubation media 溴甲酚紫葡萄糖肉湯 250(g)
李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基 1000ml/瓶 用于分離和初步鑒別單增李斯特氏菌和其它李斯特菌
*測定培養(yǎng)基250用于嬰兒食品和乳粉中*和*測定incubationmedia*測定培養(yǎng)基250用于嬰兒食品和乳粉中*和*測定
PolymyxinB
鏈霉菌 PCR Mix 6100 次運(yùn)輸葡萄糖銨培養(yǎng)基2300g用于鑒別細(xì)菌利用銨鹽作為*氮源并分解葡萄糖的試驗(yàn)。
4321-prf UCM-prf 尿道上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 500 ml incubation media 4321-prf UCM-prf 尿道上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 500 ml
胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(TSA) 300ml/袋*10 用于藥品抑菌劑效力檢測中細(xì)菌檢測
疊氮葡萄糖肉湯250g用于鏈球菌增菌培養(yǎng)
YNBMedium
鏈霉菌 PCR Mix 6100 次運(yùn)輸變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會(huì)產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會(huì)啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會(huì)很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會(huì)影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94℃ 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95℃。 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合