古細(xì)菌 + 真細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 3100 次保存使用方法:
1. 以 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見(jiàn)下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒(méi)有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見(jiàn)注) 72℃ 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
古細(xì)菌 + 真細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 3100 次保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門(mén)為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開(kāi)發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒(méi)有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見(jiàn)使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
古細(xì)菌 + 真細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 3100 次保存DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過(guò)低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68℃之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C)%含量進(jìn)行推測(cè),一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 低 5℃,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長(zhǎng)時(shí)間退火沒(méi)有必要。
Prostaglandin F2α (50 mg) 9α,11α,15S-trihydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid; Dinoprost|PGF2α; Prostaglandin F2α
Cefoxitin (sodium salt) (250 mg) Betacef|Cenomycin|Farmoxin|Mefoxin|Merxin; (6R,7S)-3-[[(aminocarbonyl)oxy]methyl]-7-methoxy-8-oxo-7-[(2-thienylacetyl)amino]-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid, monosodium salt
L-*(25GM) L-Cystine, 56-89-3; MW 236.15; ≥99%
Clenbuterol (hydrochloride) (50 mg) 4-amino-3,5-dichloro-α-[[(1,1-dimethylethyl)amino]methyl]-benzenemethanol, monohydrochloride; NAB 365|Ventipulmin; Clenbuterol (hydrochloride)
7(Z)-Tricosene (5 mg) 7Z-tricosene; 7(Z)-Tricosene
Spleen Tyrosine Kinase Inhibitor Syk Inhibitor
TBS-Corey Lactone Aldehyde (5 g) [3aR-(3aa,4a,5b,6aa)]-5-(tert-butyl-dimethylsilyl)hexahydro-2-oxo-2H-cyclopenta[b]furan-4-carboxaldehyde; TBS-Corey Lactone Aldehyde
*標(biāo)記二甲基化組蛋白H3K27多肽 Biotinylated Dimethyl Histone H3K27 Peptide (200 ul)
FTY720 phenoxy-biotin (5 mg) 2-amino-2-[2-(4-octylphenyl)ethyl]-1,3-propanediol-N-biotinoyl-1,5-diampentane; FTY720 phenoxy-biotin
3,4-EDMA (hydrochloride) (50 mg) 3,4-Ethylenedioxy-N-methylamphetamine; 1-(2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxin-6-yl)-N-methylpropan-2-amine, monohydrochloride
LE 135 (1 mg) 4-(7,8,9,10-tetrahydro-5,7,7,10,10-pentamethyl-5H-benzo[e]naphtho[2,3-b][1,4]diazepin-13-yl)-benzoic acid; LE 135
PtdIns--4)-P1 -1,2-dihexanoyl) -sodium salt) (5 mg) DHPI-4-P1|Phosphatidylinositol-4-phosphate C-6, PtdIns--4)-P1 -1,2-dihexanoyl) -sodium salt), 1-(1,2-dihexanoylphosphatidyl)inositol-4-phosphate, disodium salt
Prostaglandin E2 Express EIA Monoclonal Antibody (100 dtn) PGE2 EIA Express Antiserum; Prostaglandin E2 Express EIA Monoclonal Antibody
5-Azidopentanoic Acid (500 mg) 5-Azidovaleric acid|Click Tag
Texas Red疊氮化物 Texas Red azide
(R)-Butaprost (10 mg) 9-oxo-11。alpha。,16R-dixy7noxy-17-cyclobutyl-prost-13E-en-1-oic acid, metxyl ester; 15-deoxy-16R-xy7noxy-17-cyclobutyl PGE1 metxyl ester|TR 4978|(±)-15-deoxy-16R-xy7noxy-17-cyclobutyl PGE1 metxyl ester; (R)-Butaprost
Arachidonoyl 2’-Chloroetxylamide (25 mg) N-(2-chloroetxyl)-5Z,8Z,11Z,14Z-eicosatetraenamide; ACEA|2’-chloro-AEA; Arachidonoyl 2’-Chloroetxylamide
N-(1-((cyanometxyl)carbamoyl)cyclohexyl)-4-(4-propylpiperazin-1-yl)benzamide; AAE581 Balicatib
匹克氏肉湯基礎(chǔ)B250g用于溶血性鏈球菌選擇性增菌培養(yǎng)。
亞鹽-多粘菌素-*瓊脂基礎(chǔ) Sulfite-Polymyxin-Sulphadiazine Agar Base 用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的平板計(jì)數(shù)(GB標(biāo)準(zhǔn))
LST肉湯 LST Broth 250克 各種食品中大腸菌群近似值(MPN)測(cè)定
營(yíng)養(yǎng)瓊脂(NA)細(xì)菌計(jì)數(shù)、不含糖,可作血瓊脂基礎(chǔ)和傳代用(GB標(biāo)準(zhǔn))incubationmedia營(yíng)養(yǎng)瓊脂(NA)細(xì)菌計(jì)數(shù)、不含糖,可作血瓊脂基礎(chǔ)和傳代用(GB標(biāo)準(zhǔn))
*鹽瓊脂 250g 用于*
Brain-HeartBaptistextractionliquidmedium
雙料乳糖膽鹽(含中和劑)培養(yǎng)基 Double Lactose Bile Medium 用于化妝品中糞大腸菌群的測(cè)定(GB標(biāo)準(zhǔn))
SE增菌液 Selenite Enrichment Medium 250克 增殖標(biāo)本中的沙門(mén)氏菌
亞碲酸鹽卵黃增菌液5ml*Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)中incubationmedia亞碲酸鹽卵黃增菌液5ml*Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)中
WSSalmonellaAgar
古細(xì)菌 + 真細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 3100 次保存哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基2406g滅菌后冷至45℃左右時(shí)加入5%脫纖維羊血,用于空腸彎曲菌的培養(yǎng)。(CP、GB、EP、USP)
4651 CM 軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基 500 ml incubation media 4651 CM 軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基 500 ml
紫晶口磨 提高酒的含酯量,生香味 支/瓶
BETA-SSA瓊脂250g用于鏈球菌的選擇性分離培養(yǎng)
Cary-Blair氏*(不含瓊脂) 250g 用于運(yùn)送腸道致病菌。
古細(xì)菌 + 真細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 3100 次保存變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會(huì)產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會(huì)啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會(huì)很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會(huì)影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94℃ 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過(guò) 95℃。 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過(guò)高則引物 不能與模板牢固結(jié)合