T7 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒50 次保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
T7 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒50 次保存變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94℃ 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95℃。 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
T7 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒50 次保存DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68℃之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C)%含量進(jìn)行推測,一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 低 5℃,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長時(shí)間退火沒有必要。
T7 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒50 次保存詳細(xì)說明書:
T7 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒50 次保存使用方法:
1. 以 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
Δ17-6-keto Prostaglandin F1α (500 ug) 6-oxo-9。alpha。,11。alpha。,15S-trihydroxy-prosta-13E,17Z-dien-1-oic acid; ω-3 6-keto PGF2α; Δ17-6-keto Prostaglandin F1α
Amodiainonee (50 mg) Camoinonee|Flavoinonee|NSC 13453|SN 10751; 4-[(7-chloro-4-inoneolinyl)amino]-2-[(diethylamino)methyl]-phenol
酵母提取物(1KG) Yeast Extract, 8013-01-3
FUB-PB-22 (10 mg) inoneolin-8-yl-1-(4-fluorobenzyl)-1H-indole-3-carboxylate; FUB-PB-22
Sclerotiorin (1 mg) 7-(acetyloxy)-5-chloro-3-[(1E,3E,5S)-3,5-dimethyl-1,3-heptadien-1-yl]-7-methyl-6H-2-benzopyran-6,8(7H)-dione; Sclerotiorin
N’-[2-[2-(4-Methoxyphenyl)ethenyl]-4-inoneazolinyl]-N,N-dimethyl-1,3-propanediamine Dihydrochloride CP-31398 Dihydrochloride
DPP Assay Substrate (1 ea) DPP Substrate; DPP Assay Substrate
銀杏酸 Ginkgolic acid (5 mg)
Neurodezine (10 mg) 2-[5-(3-chlorophenyl)-2-furanyl]-4,5-bis(4-methoxyphenyl)-1H-imidazole; Neurodezine
4-fluoro PV9 (hydrochloride) (1 mg) 4-fluoro α-POP|para-fluoro-PV9; 1-(4-fluorophenyl)-2-(pyrrolidin-1-yl)octan-1-one, monohydrochloride
N-pentanoic acid metabolite-d5 (500 ug) 5-(3-(2,2,3,3-tetramethyl-cyclopropanecarbonyl)-1H-indol-1-yl)pentanoic acid-2,4,5,6,7-d5; XLR11 N-pentanoic acid metabolite-d5; N-pentanoic acid metabolite-d5
N-Palmitoyl Taurine (50 mg) N-Palmitoyl Taurine, 2-[(1-oxohexadecyl)amino]-ethanesulfonic acid
96-Well Solid Plate (Colorimetric Assay) (100 ea) 96-Well Solid Plate (Colorimetric Assay)
L-( 6-deoxy-L-Galactose; 6-deoxy-L-galactose
鈣離子指示探針Cal-520FF, 鉀鹽 Cal-520FF, potewwium salt
Lutein (500 ug) E 161b|FloraGLO|Xanthophyll; (6’R)-β,ε-carotene-3R,3’R-diol
Phytanic Acid (25 mg) 3,7,11,15-tetrametxylhexadecanoic acid; Phytanic Acid
trans-4-[[(5S)-5-[[[3,5-bis(trifluorometxyl)pxenyl]metxyl](2-metxyl-2H-tetrazol-5-yl)amino]-2,3,4,5-tetraxy7no-7,9-dimetxyl-1H-1-benzazepin-1-yl]metxyl]- cyclohexanecarboxylic acid; LY2484595 Evacetrapib
結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)2222g用于水或食品中大腸菌群平板菌落計(jì)數(shù)(GB4789.3-2002)。
脫氧膽酸鹽檸檬酸鹽瓊脂 (CM0035) Oxoid incubation media 脫氧膽酸鹽檸檬酸鹽瓊脂 (CM0035) Oxoid
苜蓿根瘤菌 產(chǎn)脂肪酶 支/瓶
mTSBBrothWithNovobiocin
PPLOAgar
0.0每支添加于HB4086中
Combinednitrogen-fixingbacteriamedium
布氏肉湯 Brucella Broth 250 用于彎曲桿菌增菌肉湯和布氏瓊脂制備(SN標(biāo)準(zhǔn))
細(xì)菌保存培養(yǎng)基250g/瓶用于菌種培養(yǎng)與保存,可制備菌種保存斜面(pH7.3)incubationmedia細(xì)菌保存培養(yǎng)基250g/瓶用于菌種培養(yǎng)與保存,可制備菌種保存斜面(pH7.3)
Baird-ParkerAgarBase
T7 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒50 次保存基酸脫羧酶試驗(yàn)基礎(chǔ)培養(yǎng)基22090250g供鑒別腸道菌屬能否產(chǎn)生基酸脫羧酶用
7221-prf PADM-prf 前脂肪細(xì)胞分化培養(yǎng)基 500 ml incubation media 7221-prf PADM-prf 前脂肪細(xì)胞分化培養(yǎng)基 500 ml
BrilliantGreenLactoseBileBroth
亞碲酸鈉肉湯培養(yǎng)基基礎(chǔ)250g用于*的增菌培養(yǎng)。每培養(yǎng)基需另加入鈉1ml
STAA培養(yǎng)基 250g 用于熱死環(huán)絲菌的分離培養(yǎng)。