使用方法:
收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代,然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
公司細胞現(xiàn)貨供應,質(zhì)量有保證、*、實驗效果好,我司為您提供免費代測服務,同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
產(chǎn)品名稱 | 胸腺上皮細胞 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 原代細胞 |
貨號 | GOY-01X1334 |
商品介紹:
名稱 胸腺上皮細胞 2.組織來源:胸腺組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介: 人胸腺上皮細胞分離自胸腺組織;胸腺是機體重要的淋巴器官,其功能與免疫緊密相關(guān),是T細胞分化、發(fā)育、成熟的場所,還可以分泌胸腺激素及激素類物質(zhì),具有內(nèi)分泌技能的器官。胸腺上皮細胞和胸腺細胞是胸腺微環(huán)境的重要組成部分,其外,胸腺上皮細胞組成了胸腺細胞不同發(fā)育階段的三維結(jié)構(gòu),根據(jù)其在胸腺中位置不同,可分為皮質(zhì)胸腺上皮細胞和髓質(zhì)胸腺上皮細胞。胸腺細胞的發(fā)育和成熟是通過在胸腺皮質(zhì)和髓質(zhì)上皮細胞的遷移過程中相互作用完成的。此外,胸腺細胞通過皮質(zhì)胸腺上皮細胞介導的陽性選擇和髓質(zhì)胸腺上皮細胞介導的陰性選擇發(fā)育為能夠識別和耐受自身主要組織相容復合體和自身抗原的成熟T淋巴細胞。胸腺上皮細胞是構(gòu)成胸腺微環(huán)境的主要成份,其形態(tài)、分布和功能多樣。表面抗原表達具有高度異質(zhì)性,與胸腺細胞結(jié)合成不同類型復合體,部分胸腺上皮細胞相互排列構(gòu)成囊泡樣結(jié)構(gòu)。電鏡觀察,可把胸腺上皮細胞分為3-6型,用抗胸腺上皮細胞單克隆抗體熒光染色可把胸腺上皮細胞分為9種類型。 5.方法簡介: ()實驗室分離的人胸腺上皮細胞采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測: ()實驗室分離的人胸腺上皮細胞經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H226 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)上皮細胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
培養(yǎng)操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
100mL SSC溶液,20× SSC, 20× 常溫
2 ug pIND pIND 低溫運輸,-20℃保存
溶血(0.1%)赫氏瓊脂 Hottinger's Agar 250g
1瓶 MEG-01細胞株 MEG-01 低溫運輸和保存
醇麥康凱瓊脂添加劑 Sorbitol MacConkey Agar Additives 1ml*5
50mg 酐 ( 牛紅血球 ) Carbonic Anhydrase 4℃保存
1000mL SSC,20X SSC,20X 常溫保存
1瓶 BaF3細胞株 BaF3 低
胸腺上皮細胞牛津瓊脂(OXA)基礎(chǔ) 英文名稱:Oxford Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠抗酒石酸酸性5b(TRACP-5b)免疫試劑盒進口、組裝
緩沖李氏菌增菌肉湯基礎(chǔ)(BLEB) 英文名稱:Buffered Listeria Enrichment Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠抗抗體(AsAb)免疫試劑盒進口、分裝
PALCAM瓊脂 英文名稱:PALCAM Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應
Half–Fraser培養(yǎng)基 英文名稱:Half-Fraser Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠抗甲狀腺過氧化物抗體(TPO-Ab)免疫試劑盒*直銷
Fraser培養(yǎng)基 英文名稱:Fraser Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)免疫試劑盒進口、組裝
PALCAM添加劑1 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:1ml/支*5 小鼠抗環(huán)胍肽抗體(Anti-CCP-antibody)免疫試劑盒進口、分裝
LPM瓊脂 英文名稱:LPM Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠抗核小體抗體(IgG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應
改良緩沖蛋白胨水(MBP) 英文名稱:Modified Buffered Peptone Water 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)免疫試劑盒*直銷
Fraser(FB2)添加劑 英文名稱:Fraser Supplement 產(chǎn)品規(guī)格:5ml*2 小鼠抗核抗體IgG 免疫試劑盒進口、組裝
UVM培養(yǎng)基 英文名稱:UVM Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠抗弓形蟲抗體(IgG)免疫試劑盒進口、分裝