細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經(jīng)濟

可提供大量、同一時期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實驗對象。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品介紹：

名稱    大鼠外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞

2.組織來源：外周血

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

大鼠外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。內(nèi)皮祖細(xì)胞是血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，亦稱為成血管細(xì)胞（Angioblast），是一群具有游走特性，能進一步增殖分化的幼稚內(nèi)皮細(xì)胞，缺乏成熟內(nèi)皮細(xì)胞的特征性表型，不能形成管腔樣結(jié)構(gòu)，其功能主要為參與了出生后缺血組織的血管發(fā)生和血管損傷后的修復(fù)。研究顯示，內(nèi)皮祖細(xì)胞在心腦血管疾病、外周血管疾病、腫瘤血管形成及創(chuàng)傷愈合等方面均發(fā)揮重要作用，并為缺血性疾病的研究治療提供了新思路，EPCs生物學(xué)特性和治療作用的研究成為這一領(lǐng)域新的熱點。

5.方法簡介：

()實驗室分離的大鼠外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞采用采集外周血、密度梯度離心、差速貼壁法結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

()實驗室分離的大鼠外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞經(jīng)CD34免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-R134

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性可傳1-2代；不建議多次傳代

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

處理方法：

收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯(lián)系。并進行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細(xì)胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達到80%以上，進行傳代。

實驗操作步驟：  

a．采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預(yù)實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

2 ug pSUOER-retro-neo/GFP pSUOER-retro-neo/GFP 低溫運輸，-20℃保存 78-5000 pg/mL 人白介素1受體關(guān)聯(lián)激3(IRAK-3)ELISA試劑盒

100mL 重蒸 Redistilled Phenol 常溫避光保存 0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Oxidative stress-induced growth inhibitor 2

2 ug pCMV-Tag 3A pCMV-Tag 3A 低溫運輸，-20℃保存

大鼠外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞ZNRF3  鋅指蛋白3/環(huán)指蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml

20次 即用型藍白T載體A型（T7-SP6，有MCS） Instant Blue-White Vector T，Type A -20℃保存

1瓶 HFL1細(xì)胞株 HFL1 低溫運輸和保存

1mL 秋水仙素溶液 Colchicine Solution 常溫保存

phospho-GIT1(Tyr554)   磷酸化G蛋白偶聯(lián)受體激相互作用蛋白1 規(guī)格: 0.1ml

P2X2/ATP receptor  嘌呤受體P2X2抗體 規(guī)格: 0.1ml

RNF121  環(huán)指蛋白121抗體 規(guī)格: 0.2mlLAMA3/Laminin 5 alpha 3  層粘蛋白α3抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-DARPP32(Thr75)  磷酸化多巴胺/cAMP調(diào)節(jié)磷蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-BRCA1(Ser1423)  磷酸化易基因1抗體 規(guī)格: 0.1ml

AKAP2  蛋白激A2抗體 規(guī)格: 0.2ml

LY-86/MD-1  MD-1蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-EGFR(Tyr845)  磷酸化表皮生因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml