細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好,我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),同時(shí)提供最新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 小鼠腓腸肌細(xì)胞 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類(lèi) | 原代細(xì)胞 |
貨號(hào) | GOY-01X1418 |
商品介紹:
名稱(chēng) 小鼠腓腸肌細(xì)胞 2.組織來(lái)源:骨骼肌組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介: 小鼠腓腸肌細(xì)胞分離自小腿肌肉組織;腓腸肌位于小腿后面的皮下,是一個(gè)淺表的肌肉,當(dāng)人體站立時(shí),可以在小腿后面看到隆起肌肉的輪廓就是腓腸肌。腓腸肌為小腿后側(cè)群淺組肌肉,有內(nèi)、外二頭,內(nèi)側(cè)頭起自股骨內(nèi)側(cè)髁上的三角形隆起,外側(cè)頭起自股骨外側(cè)髁的近側(cè)端,在二頭的深面各有一滑膜囊。腓腸肌的二肌腹增大,在腘窩下角彼此鄰近,所成夾角多為25°~30°,此肌下行與比目魚(yú)肌移行為跟腱,止于跟骨結(jié)節(jié)。腓腸肌的動(dòng)脈發(fā)自腘動(dòng)脈、靜脈與動(dòng)脈伴行,注入腘靜脈或小隱靜脈。腓腸肌的神經(jīng)全部來(lái)自脛神經(jīng)。包括內(nèi)、外側(cè)肌神經(jīng)。腓腸肌在行走及站立時(shí)能提足跟向上,直立時(shí),腓腸肌和比目魚(yú)肌都參加強(qiáng)固膝關(guān)節(jié),并調(diào)節(jié)小腿和足的位置。脛前皮膚缺損或深部竇道及瘢痕,可以切取腓腸肌內(nèi)側(cè)頭及其皮面皮膚所形成的肌皮瓣向前旋轉(zhuǎn)。腓腸肌還可影響足的縱弓,該肌癱瘓或時(shí),足縱弓將加深。該肌由脛神經(jīng)支配,股骨髁上骨折時(shí),因腓腸肌收縮遠(yuǎn)側(cè)端常自后移位。腓腸肌是脛骨和腓骨后面的一塊肌肉。腓腸肌細(xì)胞屬于骨骼肌細(xì)胞的一種,骨骼肌又稱(chēng)橫紋肌,肌肉中的一種,約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長(zhǎng)柱形的多核細(xì)胞,肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌,橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌,其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的器官,有豐富的血管、淋巴分布,在軀體神經(jīng)支配下收縮或舒張,進(jìn)行隨意運(yùn)動(dòng)。肌肉可根據(jù)共形狀、大小、位置、起止點(diǎn)、纖維方向和作用等命名。依形態(tài)命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨狀肌等。骨骼肌細(xì)胞呈纖維狀,不分支,有明顯橫紋,核很多,且都位于細(xì)胞膜下方。肌細(xì)胞內(nèi)有許多沿細(xì)胞長(zhǎng)軸平行排列的細(xì)絲狀肌原纖維。每一肌原纖維都有相間排列的明帶(Ⅰ帶)及暗帶(A帶)。明帶染色較淺,而暗帶染色較深。暗帶中間有一條較明亮的線(xiàn)稱(chēng)H線(xiàn)。H線(xiàn)的中部有一M線(xiàn)。明帶中間,有一條較暗的線(xiàn)稱(chēng)為Z線(xiàn)。兩個(gè)Z線(xiàn)之間的區(qū)段,叫做一個(gè)肌節(jié)。骨骼肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展,細(xì)胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細(xì)胞匯合,多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng),高低起伏;細(xì)胞密度低時(shí),常交織成網(wǎng)狀;密度高時(shí),則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。 5.方法簡(jiǎn)介: ()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腓腸肌細(xì)胞采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè): ()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腓腸肌細(xì)胞經(jīng)α-Sarcometric actin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-M319 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳3-5代左右 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
使用方法:
收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀(guān)察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細(xì)胞*貼壁后,培養(yǎng)觀(guān)察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi);
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)甲磺酸乙脂突變誘導(dǎo)試劑盒 10次
純化線(xiàn)粒體ATP生物發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒 50次
細(xì)胞ATP生物發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒 50次
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細(xì)ATP生物發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒 50次
真/酵母ATP生物發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒 50次
植物ATP生物發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒 50次
食物污染ATP生物發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒 50次
小鼠腓腸肌細(xì)胞疊氮鈉葡萄糖肉湯 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Azide Dextrose Broth用于鏈球菌的增菌培養(yǎng)250兔過(guò)氧化物體增殖物激活受體β(PPARβ)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
乙基紫疊氮鈉肉湯 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Ethyl Violet Azide Broth用于鏈球菌的增菌培養(yǎng)250兔過(guò)氧化物體增殖物激活受體α(PPARA)免疫試劑盒*直銷(xiāo)
KF鏈球菌瓊脂 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)KF Streptococcus Agar用于鏈球菌的選擇性分離及計(jì)數(shù)(SN標(biāo)準(zhǔn))100兔骨橋素(OPN)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
LIM培養(yǎng)基進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)LIM Medium用于鏈球菌的分離培養(yǎng)(Japan方法)250兔骨鈣素/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
BETA-SSA 瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)BETA-SSA Agar用于鏈球菌的選擇性分離培養(yǎng)(ACUMEDIA方法)250兔骨保護(hù)素(OPG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
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改良鹽緩沖液PSB 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Phosphate Saline Buffer,Modified用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌冷增菌培養(yǎng) (GB標(biāo)準(zhǔn))250兔干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
ITC 肉湯進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)ITC Broth用于分離培養(yǎng)耶爾森氏菌(ISO方法)250兔鈣結(jié)合蛋白(CALB2)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
CIN-1I培養(yǎng)基基礎(chǔ) 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Cepulodin Irgasan Novobiocin Agar用于分離小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 (GB標(biāo)準(zhǔn))250兔兒茶胺(CA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
營(yíng)養(yǎng)肉湯(NB)進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Nutrient Broth一般細(xì)菌培養(yǎng),轉(zhuǎn)種,復(fù)壯,增菌等.也可用于消毒效果測(cè)定250兔多肽YY(PYY)免疫試劑盒*直銷(xiāo)