當前位置:上海邦景實業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>糖異生系列>> 糖原合成酶(GCS)測試盒微量法
貨號 | BJ-01611377-1 |
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商品介紹:
測定意義: GCS(EC 2.4.1.11)催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP,以α-1,4-糖苷鍵相連延長糖鏈,是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶,是胰島素作用的主要靶酶,對糖代謝的調(diào)節(jié)和血糖穩(wěn)態(tài)的維持具有重要作用。 測定原理: GCS催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP,丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下測定NADH下降速率,即可反映GCS活性。 需自備的儀器和用品: 分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
糖原合成酶(GCS)測試盒微量法 | 微量法 | 100管/96樣 | BJ-01611377-1 |
測定步驟:
1、 酶標儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測定各管吸光值A(chǔ)。
注意事項:
待測樣品-70℃可保存1個月。需注意反復(fù)凍融會導(dǎo)致SOD部分失活。
一個試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時適當分裝,以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測效果下降。
標準品稀釋時所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時,標準品也宜使用SOD樣品制備液進行稀釋;當樣品為血液等無需處理的樣品時,宜使用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液稀釋標準品。
抗氧化物會對本試劑盒的檢測產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會使測定出來的吸光度顯著升高。此時盡管樣品沒有顏色,如果設(shè)置了使用說明中的空白對照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
實驗方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
優(yōu)點如下:
1、快速簡便:全程約50分鐘,可測100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測紅細胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測白細胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗: X =103.3%。
7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少,重復(fù)性強。
8、測試面廣:可測動物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細胞、細菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
IQCC蛋白抗體嗜腳動物咸海鮮球菌白果新suan
IQCA1蛋白抗體硝suan鹽還原嗜鹽桿菌20(S)-人參皂苷 F1
集成復(fù)雜蛋白亞單位3抗體棲土曲霉山麥冬皂苷B
干擾sualpha 14蛋白抗體矩圓黑盤孢干姜
白介su6抗體孤島海桿狀菌益智
白介su-10抗體嗜松籃狀菌巴戟天
白介su6抗體環(huán)狀芽胞桿菌冬蟲夏草
磷suan化內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白a1抗體植物乳桿菌植物亞種槐米
白介su28受體抗體黑曲霉寬葉纈草
KB抑制蛋白激酶Ζ抗體*櫻桃鏈格孢
胰島su基因增強結(jié)合蛋白1抗體球孢白僵菌硝基呋喃酰(呋喃丙雜質(zhì)A)
整合suβ1結(jié)合蛋白2抗體亞歷山大富鹽菌鹽suan莫索尼定
線粒體翻譯起始因子3抗體爪哇根霉小鼠骨橋su(OPN)Elisa測定試劑盒
白介su27β抗體黑曲霉小鼠催乳su(PRL)Elisa測定試劑盒
胰島su樣生長因子1受體抗體栗疫菌B因子(BF)Elisa測定試劑盒
糖原合成酶(GCS)測試盒微量法粒巨噬集落激因子(GMCSF/CSF2)試劑盒 Anti-CEP170 Antibody多巴受體-D3抗原
巨噬來源的趨化因子(MDC/CCL22)試劑盒Anti-CEP152 Antibody多巴受體-D4抗原
谷胱還原酶(GR)試劑盒Anti-CEP170 Antibody多巴受體-D5抗原
抗磷壁suan(TA)試劑盒 Anti-CEP290 Antibody多巴β羥化酶(抗原)
β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)試劑盒Anti-CEP290 Antibody結(jié)直腸癌缺失基因抗原
成纖維生長因子受體1(FGFR1)試劑盒 Anti-CEP350 Antibody雙皮質(zhì)su抗原
唾液酶α1(AMY1)試劑盒 Anti-CEP57 Antibody損傷DNA結(jié)合蛋白2抗原
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