（貨號：WLRB8207KIT）
原理概述：
本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術：在恒溫條件下（42 °C），特殊修飾的反轉錄酶利用特異性引物DNA和模板RNA合成cDNA鏈，反應體系中的重組酶、單鏈DNA結合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA鏈為模板進行快速核酸擴增反應。適用于實驗室級別的RNA擴增以及其他檢測用途的RNA擴增使用。
產品特點：
本試劑盒具有靈敏度高、特異性強、反應時間短（僅需30 mins）等優(yōu)點，反應組分為干粉狀態(tài)，操作簡便，易于保存。
本試劑對設備要求低，金屬浴、水浴鍋等即可進行反應操作，無需購買PCR擴增儀等價格高昂的專屬設備。
引物設計：
建議使用長度在 30-35 bp的引物，引物過短會影響擴增速度和檢測靈敏度；引物設計避免形成二級結構而影響擴增；擴增子長度建議在150-500 bp。
試劑盒組成：
| 組成 | 含量 |
| A buffer | 1.6 mL×1管 |
| B buffer | 150 μL×1管 |
| 試劑 | 48份 |
| 使用說明書 | 1份 |
試劑盒儲存：
運輸條件：低溫運輸；
儲存條件：儲存溫度 ≤ -20 oC，避光保存，避免重壓和反復凍融；
產品有效期：14個月。
操作步驟：提前30分鐘將試劑盒所需組分取出，室溫融化，震蕩混勻。
1) 每個干粉反應管加入29.4 μL A buffer（注意：A buffer需融化混勻，否則會對實驗效果產生影響）；
2) 每個反應管分別加入2 μL上游引物和2 μL下游引物（引物濃度10 μM，對于多個反應、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應管中）；
3) 向反應管中依次加入12.1 μL ddH2O和2 μL核酸模板（可根據核酸濃度調整加入的核酸模板體積，并相應調整加入的ddH2O體積，至模板與ddH2O總體積為14.1 μL）;
4) 最后向反應管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（（請務必上下顛倒甩動反應管8-10次進行混勻；對于多個反應，建議將B buffer加至反應管的蓋子內側上下顛倒后混勻）；
5) 混勻后，將反應液甩（或快速離心）至管子底部，然后立即將反應管放入恒溫設備中42 oC孵育30 mins；
6) 反應結束后，加入Tris飽和酚/氯仿/異戊醇（25：24：1）抽提液，1:1混勻抽提反應液，12000 rpm離心5 mins，取5 μL上清進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。（注：不建議用高溫變性法去蛋白，高溫變性并不能起到有效去除蛋白的效果，還是會對電泳分析產物造成影響。也不推薦用市面上銷售產物純化試劑盒對反應產物進行純化后再電泳。很多品牌的純化試劑盒無法達到預期效果，容易造成假陰性。）
體系配制
| 組分 | 體積（μL） |
| A buffer | 29.4 |
| 上游引物(10 μM) | 2 |
| 下游引物(10 μM) | 2 |
| ddH2O和RNA模板 | 14.1 |
| B buffer | 2.5 |
| 總體積 | 50 |
注意事項：
1． 由于試劑盒靈敏度非常高，在進行反應時請注意避免核酸污染，并設置空白對照；
2． 使用時請取出實驗所需的MIRA反應單元的數量，剩余部分請置于存儲條件下。
