小鼠單核巨噬細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：眼球脈絡(luò)膜成纖維細(xì)胞 英文名稱：HOCF 規(guī)格:5 x 10^5 cells/vial
結(jié)膜上皮細(xì)胞 英文名稱：HConEC 規(guī)格:5 x 10^5 cells/vial
絨毛膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞 英文名稱：HVCEC 規(guī)格:1 x 10^6 cells/vial
羊膜上皮細(xì)胞 英文名稱：HAmEpiC 規(guī)格:5 x 10^5 cells/vial
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
產(chǎn)品屬于：
產(chǎn)品名稱：小鼠單核巨噬細(xì)胞
產(chǎn)品英文：J774A.1
貨號：FS-01X9665
細(xì)胞培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS+1%P/S
生長狀態(tài)：貼壁生長
產(chǎn)品規(guī)格：1×106
單位：T25/瓶
是否提供細(xì)胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告
保存培養(yǎng)溫度（℃）37
運輸溫度（℃）：常溫
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細(xì)胞 在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。 3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性 通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。 4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄 采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。 |
注意事項：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。 2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。 3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。 4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。 6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。 7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 |
人可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒Human soluble Cluster of differentiation 86,sCD86 ELISA Kit
人巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒Human Macrophage Migration Inhibitory Factor,MIF ELISA Kit
人組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA試劑盒Human Tissue factor pathway inhibitor,TFPI ELISA Kit
人干擾誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA試劑盒Human interferon-inducible protein 10,IP-10 ELISA Kit
人巨噬細(xì)胞炎性蛋白5(MIP-5)ELISA試劑盒Human macrophage inflammatory protein 5,MIP-5 ELISA Kit
人結(jié)締組織生長因子(CTGF)ELISA試劑盒Human connective tissue growth factor,CTGF ELISA Kit
人B細(xì)胞活化因子受體(BAFF-R)ELISA試劑盒 Human B cell activation factorr from the tumor necrosis factor family receptor,BAFF-R ELISA Kit
人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體3(VEGFR-3/Flt-4)ELISA試劑盒Human Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 2,VEGFR-2/Flk-1 ELISA Kit
人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)ELISA試劑盒Human Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 1,VEGFR-1/Flt1 ELISA Kit
人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子D(VEGF-D)ELISA試劑盒Human Vascular Endothelial cell Growth Factor D,VEGF-D ELISA Kit
人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子C(VEGF-C)ELISA試劑盒Human Vascular Endothelial cell Growth Factor C,VEGF-C ELISA Kit
人可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sTRAIL)ELISA試劑盒 Human soluble tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,sTRAIL ELISA Kit
人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)ELISA試劑盒Human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 4,TRAIL-R4 ELISA Kit
人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(TRAIL-R3)ELISA試劑盒Human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 3,TRAIL-R3 ELISA Kit
人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體1(TRAIL-R1)ELISA試劑盒Human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 1,TRAIL-R1 ELISA Kit
人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA試劑盒Human Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅱ,TNFsR-Ⅱ ELISA Kit
人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒Human Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅰ,TNFsR-ⅠELISA Kit
人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA試劑盒 Human Stromal cell derived factor 1β,SDF-1β ELISA Kit
人干細(xì)胞因子受體(SCFR)ELISA試劑盒Human Stem Cell Factor Receptor,SCFR ELISA Kit
小鼠單核巨噬細(xì)胞Adducin protein 內(nèi)收蛋白抗體 0.1ml
phospho-c-Jun(Thr91+Thr93) 磷化原癌基因c-Jun抗體 0.1ml
Gibberellins 抗赤霉抗體 0.1ml
phospho-AQP2(Ser264/261) 磷化水通道蛋白2抗體 0.1ml
Mycobacterium bovis 牛結(jié)核桿菌菌體蛋白抗體 0.2ml
CK12/Cytokeratin 12 細(xì)胞角蛋白12抗體 0.2ml
HE4/Epididymal secretory protein E4 附睪分泌蛋白4抗體 0.2ml
Beta galactosidase β半乳糖抗體 0.2ml
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
