中文名稱:草酸銨結(jié)晶紫染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100ml
貨號:FS-X10152
產(chǎn)品介紹:
用途: 改良的細(xì)菌革蘭染色 注意事項: conn改良Weigert革蘭染色液的一種 儲存條件:室溫,24個月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
釀酒酵母單跨膜蛋白FOXRED1抗體Human AAGAB (Alpha- and gamma-adaptin-binding protein p34) 綿羊彈性蛋白2,中性粒(ELA2)免疫試劑盒
淺紫灰鏈霉菌淺紫灰亞種FOXRED2蛋白抗體Human AGPS (Alkyldihydroxyacetonephosphate synthase, peroxisomal) 綿羊催產(chǎn)(OT)免疫試劑盒
釀酒酵母巖藻糖1磷鳥酰轉(zhuǎn)移抗體Human ADRB2 (Beta-2 adrenergic receptor) 綿羊雌二(E2)免疫試劑盒
雷斯青霉外基質(zhì)蛋白FREM1抗體Human ALMS1 (Alstrom syndrome protein 1) 綿羊成纖維生長因子23(FGF23)免疫試劑盒
(蠟狀芽胞桿菌)原癌基因FRAT1抗體Human ADRA1D (Alpha-1D adrenergic receptor) 綿羊補(bǔ)體片段3b受體(C3bR)免疫試劑盒
黑曲霉叉頭蛋白D1抗體Human AMER1 (APC membrane recruitment protein 1) 綿羊補(bǔ)體片段3a(C3a)免疫試劑盒
長柔毛栓孔菌11重鏈抗體Human AMBN (Ameloblastin) 綿羊白介8(IL-8/CXCL8)免疫試劑盒
謝瓦曲霉12輕鏈抗體Human APCDD1 (Protein APCDD1) 綿羊白介6(IL-6)免疫試劑盒
表皮葡萄球菌FLAG Tag標(biāo)簽抗體(C端)Human ADRB1 (Beta-1 adrenergic receptor) 綿羊白介4(IL-4)免疫試劑盒
苛求芽胞桿菌補(bǔ)體因子I重鏈抗體Human SPAG9(C-Jun-amino-terminal kinase-interacting protein 4) 綿羊白介2受體(IL-2R)免疫試劑盒
煙管菌8/第八/第八因子相關(guān)抗原輕鏈抗體Human ADAR (Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase) 綿羊白介2(IL-2)免疫試劑盒
節(jié)桿菌磷化叉頭蛋白4抗體Human STC2(Stanniocalcin-2) 綿羊白介1β(IL-1β)免疫試劑盒
青霉磷化叉頭蛋白4抗體Human ADCY9 (Adenylate cyclase type 9) 綿羊白介1α(IL-1α)免疫試劑盒
普利茅斯氏菌甲基肽受體1抗體Human AHCYL1 (Adenosylhomocysteinase 2) 綿羊白介13(IL-13)免疫試劑盒
甲型副傷門氏菌磷化粘著斑激抗體Human ADSL(Adenylosuccinate lyase) 綿羊白介12(IL-12)免疫試劑盒
窄食單胞菌FUT5抗體Human AHCYL2 (Adenosylhomocysteinase 3) 綿羊白介10(IL-10)免疫試劑盒
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,>99%(GC)醋辛酯
鹽海桿狀菌Marinobacter│salsuginis 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC, ≥99.5% (GC)蟲草
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC,≥99.5%(GC)補(bǔ)骨脂二氫黃
草酸銨結(jié)晶紫染色液黃曲霉 雙水楊酯異淀粉
海科貝特氏 1-磺酰哌ADP
孔雀石綠鏈霉 5-溴-3-甲基-1H-吲唑葉綠b還原
紫紅曲霉 5-溴-2,3-二氫異-1-酮葉綠代謝產(chǎn)物還原
貝倫格葡萄座腔梨生?;?/span> 2-氨基-5-甲基吡褪黑色合成
紫芝 5-甲基吡-2-羧酰類胡蘿卜裂解雙加氧
微小桿 吩-1-甲酰蔗糖合成分解方向
植物乳桿 6--7-氮雜精脫亞氨
齊藤土星形酵母 7-氧代-7-氮雜β-微管蛋白
彩色豆馬勃 3-((2-巰基-1-甲基基)硫)-2-丁蛋白激C
茄勞爾氏 3-溴-6-羥基-2-蛋白激B
凍膠假絲酵母 5--2-甲氧基煙蛋白激K
球孢白僵 1,2-二-(3-氧基)乙烷脈斑駁病
2,3-二三氟甲苯褪綠病
雞葡萄球 3-溴-1,5-二氫-4H-吡唑并[3,4-D]嘧啶-4-酮輕斑駁病