中文名稱:天青石藍(lán)B染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:50ml|100ml
貨號:FS-X10054
產(chǎn)品介紹:
用途: 蘇木素染色 注意事項: 染色效果好于普通蘇木素伊紅染色。 儲存條件:4℃,避光,12個月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
金黃殼囊孢4號染色體開放閱讀框51抗體Human SMOX(Spermine oxidase) 人結(jié)核菌桿(TB)抗體(IgA)免疫試劑盒
海角副球菌分支GBE1抗體Human AMOT(Angiomotin) 人結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)免疫試劑盒
擬莖點霉磷化絲切蛋白抗體Human P7(Caspase-7) 人結(jié)締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)免疫試劑盒
平田頭菇補體成分5受體1抗體Human NEFH(Neurofilament heavy polypeptide) 人結(jié)蛋白(DES)抗體免疫試劑盒
廣島鏈霉菌分裂周期2樣蛋白激6抗體Human HSD11B1(Corticosteroid 11-beta-dehydrogenase isozyme 1) 人結(jié)蛋白(Des)免疫試劑盒
硬結(jié)節(jié)桿菌補體C3IP1抗體Human SEMA3A(Semaphorin-3A) 人角化生長因子(KGF)免疫試劑盒
果生鏈核盤菌磷化周期檢測點激2抗體Human HRG(Histidine-rich glycoprotein) 人角化內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)免疫試劑盒
異常漢遜酵母變種周期依賴性激11抗體Human SMOX(Spermine oxidase) 人膠轉(zhuǎn)蛋白(TAGLN)免疫試劑盒
芬娜冬菇周期依賴性激10Human SSTR2(Somatostatin receptor type 2) 人膠質(zhì)系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)免疫試劑盒
枯草芽胞桿菌枯草亞種8號染色體開放閱讀框86抗體Human P7(Caspase-7) 人膠原吡啶交聯(lián)(PYD)免疫試劑盒
特異青霉(產(chǎn)黃青霉)磷化分裂周期蛋白25B抗體Human NEFH(Neurofilament heavy polypeptide) 人降脂(Adipsin)免疫試劑盒
血痕韌革菌磷化分裂周期蛋白25B抗體Human AMOT(Angiomotin) 人降鈣原(PCT)免疫試劑盒
鹽古桿菌磷化半胱蛋白蛋白6抗體Human APLN(Apelin) 人降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)免疫試劑盒
高盧蜜環(huán)菌9號染色體開放閱讀框172抗體Human GAS1(Growth arrest-specific protein 1) 人降鈣(CT)免疫試劑盒
球孢白僵菌磷化P27抗體/周期依賴激抑制劑Human MASP2(Mannan-binding lectin serine protease 2) 人堿性胎兒蛋白(BFP)免疫試劑盒
發(fā)酵成對桿菌表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白2抗體Human TFR2(Transferrin receptor protein 2) 人堿性磷(ALP)免疫試劑盒
冷海黃桿菌Flavobacterium│frigidimaris 質(zhì)量規(guī)格:AR白皮杉;
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:AR紫草呋喃A
外來毛霉Mucor│adventitius 質(zhì)量規(guī)格:IND光萼野百合堿;烏沙拉明 光萼豬屎豆堿;
天青石藍(lán)B染色液醋桿科 1,4-二代丁烷無翅型MMTV整合位點家族成員7B
彎孢 2-羥基苯絲蛋白1
粉紅單端孢 鄰氨基苯鹽鹽易洛魁族同源盒基因5
紋孢青霉 三羧三乙酯接觸蛋白相關(guān)蛋白樣4
繩狀青霉 乙二二硬脂受體相互作用蛋白1
傳染性法氏囊病病 氟化氫吡啶絡(luò)合物受體相互作用蛋白3
發(fā)酵乳桿 3-(三氟甲氧基)苯甲酰過氧化物4
紐纏叢梗孢 二乙氫鹽,98%檢測Arl6ip5
孟氏假單胞 4-溴-2-(三氟甲基)苯甲肝癌源性生長因子
假單胞屬 N-烯自噬相關(guān)蛋白5
松生擬層孔 Fmoc-Leu-OPfp自噬相關(guān)蛋白7
蘇云金芽孢桿 N-甲基正β-己糖亞基α
運動發(fā)酵單胞運動亞種 6-羥基-2H-苯并呋喃-3-酮亞硝基還原
諾卡氏屬 FMOC-L-纈五氟苯酯補體成分1q受體
黃單胞 2--6-硝基喹喔啉腎母過度表達(dá)基因