收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
大鼠肺大靜脈內皮細胞【Rat Lung: Normal Vein Endothelial Cells】產品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩(wěn)定。在生物技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
產品名稱 | 大鼠肺大靜脈內皮細胞說明 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963867 |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
RatProAialNaiureticPeptide,Pro-ANP大鼠前心肽(Pro-ANP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 異維A酸(標準品) Isotretinoin 質量規(guī)格:HPLC>99%,標準品
RatProAialNaiureticPeptide,Pro-ANPELISA試劑盒大鼠前心肽(Pro-ANP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 美羅培南 Meropenem trihydrate 質量規(guī)格:>98%,BR,三水合物
RatprocollagenⅠN-terminalpeptide,PⅠNP大鼠Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 美羅培南(標準品) Meropenem trihydrate 質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品,三水合物
RatprocollagenⅠN-terminalpeptide,PⅠNPELISA試劑盒大鼠Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 硫酸卡那霉素 Kanamycin mono sulfate 質量規(guī)格:效價≥750IU/MG,BP,BR
RatprocollagenⅢN-terminalpeptide,PⅢ大鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 硫酸卡那霉素(標準品) Kanamycin mono sulfate 質量規(guī)格:效價測定
RatprocollagenⅢN-terminalpeptide,PⅢELISA試劑盒大鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 酮舍林鹽 Ketanserin Tartrate 質量規(guī)格:>98.5%,BR
RatProgesterone,PROG大鼠孕激素/孕同(PROG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 酮舍林鹽(標準品) Ketanserin Tartrate 質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
RatProgesterone,PROGELISA試劑盒大鼠孕激素/孕同(PROG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 酮康唑 Ketoconazole 質量規(guī)格:>99%,BR
Ratprogesteronereceptor,PGR大鼠孕同受體(PGR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 酮康唑(標準品) Ketoconazole 質量規(guī)格:HPLC>99%,標準品
Ratprogesteronereceptor,PGRELISA試劑盒大鼠孕同受體(PGR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 霉素,柱晶白霉素 Kitasamycin 質量規(guī)格:效價≥1300U/MG,BR
動物源性食品羊源試劑盒20 亞精胺鹽 Spermidine phosphate salt hexahydrate 質量規(guī)格:>98%(T),進口原裝
RatVitaminD2,VD2ELISA試劑盒大鼠維生素D2(VD2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 多球殼菌素;嗜熱菌殺酵母素(來源于無孢霉群) Myriocin from Mycelia sterilia 質量規(guī)格:≥98%,sigma分裝
小鼠熱休克轉錄因子1(HSF1)ELISA試劑盒 ,英文名: HSF1 ELISA Kit 亞精胺鹽酸鹽 Spermidine tri 質量規(guī)格:≥98%
豬透明質酸(HA)ELISA檢測試劑盒PorcineHyaluronicacid,HAELISAKit 96T/48T 栗精胺 Castanospermine 質量規(guī)格:>98%,進分
大鼠轉化生長因子β2(TGF-β2)試劑盒 Rat ansforming Growth factor β2,TGF-β2 ELISA kit 精胺四鹽酸鹽;鹽酸精胺 Spermine tetra 質量規(guī)格:>98%,分子生物學級
英文名稱HumanIerleukin-15,IL-15ELISAKIT人白介素-15(IL-15)規(guī)格:96T/48T D-熒光素鉀鹽,D-蟲熒光素鉀鹽 D-Luciferin potassium 質量規(guī)格:>98%,BR
動物源性食品豬源試劑盒20 鹽酸雷尼替丁 Ranitidine HCl 質量規(guī)格:>98%
RatVitaminD3,VD3ELISA試劑盒大鼠維生素D3(VD3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 鹽酸雷尼替丁(標準品) Ranitidine HCl 質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
小鼠熱休克因子1(HSF1)ELISA試劑盒 ,英文名: HSF1 ELISA Kit 熒光素鈉 Fluorescein di salt 質量規(guī)格:BS
小鼠結締組織生長因子(CTGF)ELISA檢測試劑盒Mouseconnectivetissuegrowthfactor,CTGFELISAKit 96T/48T D-蟲熒光素鈉鹽;D-熒光素鈉鹽 D-Luciferin salt 質量規(guī)格:>98%
大鼠肺大靜脈內皮細胞說明大鼠熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA檢測試劑盒Ratheatshockprotein20,hSP-20ELISAKit 96T/48T 沒食子兒茶素(標準品) GC; (-)-gallocatechin 質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
大鼠熱休克蛋白20(HSP-20)試劑盒 Rat heat shock protein 20,hSP-20 ELISA Kit 沒食子兒茶素 HPLC≥98% 20mg
大鼠熱休克蛋白27(HSP-27)ELISA檢測試劑盒Ratheatshockprotein27,HSP-27ELISAKit 96T/48T 茅蒼術醇 HPLC≥98% 20mg
大鼠熱休克蛋白27(HSP-27)試劑盒 Rat heat shock protein 27,HSP-27 ELISA Kit 毛葉香茶菜丁素 HPLC≥98% 5mg
大鼠熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA檢測試劑盒Ratheatshockprotein40,hSP-40ELISAKit 96T/48T 毛蕊異黃酮苷(標準品) Calycosin-7-O-β-D-glucoside 質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
大鼠熱休克蛋白40(HSP-40)試劑盒 Rat heat shock protein 40,hSP-40 ELISA Kit 毛蕊異黃酮苷 HPLC≥98% 20mg
大鼠熱休克蛋白47(HSP47)試劑盒 t heat shock protein,HSP47 ELISA Kit 毛蕊異黃酮(標準品) Calycosin 質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
大鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA檢測試劑盒Ratheatshockprotein60,hSP-60ELISAKit 96T/48T 毛蕊異黃酮 HPLC≥98% 20mg
大鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)試劑盒 Rat heat shock protein 60,hSP-60 ELISA Kit 毛兩面針素 HPLC≥98% 20mg
大鼠熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA檢測試劑盒Ratheatshockprotein70,hSP-70ELISAKit 96T/48T 毛蘭素(標準品) 3'-Hydroxy-3,4,4',5-tetraMethoxybibenzyl 質量規(guī)格:供含量測定用