注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號(hào) | CS-963928 |
大鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞【Rat Embryo: Normal Fetal Epidermal Keratinocytes】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
大鼠組胺(HIS)ELISA檢測(cè)試劑盒RatHistamine,HIS 96T/48T 氯化銫 Cesium chloride 質(zhì)量規(guī)格:>99%,分子生物學(xué)級(jí)
大鼠組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA檢測(cè)試劑盒Rathiston-H2b 96T/48T 氫二鈉七水 phosphate, dibasic, heptahydrate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
大鼠組織蛋白酶K(cath-K)ELISA檢測(cè)試劑盒RatCathepsinK,cath-K 96T/48T dATP溶液(100 mM) dATP 100 mM solution 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
大鼠組織蛋白去乙?;?/span>(HD)ELISA檢測(cè)試劑盒RatHistoneDeacetylase,HD 96T/48T 癸酸鈉 decanoate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,進(jìn)分
大鼠組織多肽抗原(TPA)ELISA檢測(cè)試劑盒RatTissuePolypeptideAigen,TPA 96T/48T 瓊脂糖(美侖電泳級(jí)) Agarose 質(zhì)量規(guī)格:美侖,電泳級(jí)
大鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA檢測(cè)試劑盒RatTissue-typePlasiminogenActilyse,t-PA 96T/48T 瓊脂糖(Sigma) Agarose 質(zhì)量規(guī)格:Sigma原裝
大鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA檢測(cè)試劑盒RatTissuefactorpathwayinhibitor,TFPI 96T/48T 植物血凝素 Phytohemagglutinin 質(zhì)量規(guī)格:BR
大蒜*培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑 6-糠基氨基嘌呤,激動(dòng)素 Kinetin,6-Furfurylaminopurine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
大巖筒(gloxinia)增殖培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑 乙二醇雙(2-氨基乙基醚)四乙酸 EGTA, egtazic acid 質(zhì)量規(guī)格:>98%,分子生物學(xué)級(jí)
單胺氧化酶系列高通量篩選熒光檢測(cè)試劑盒500 無水二氫鈉(分子生物學(xué)級(jí)) phosphate, monobasic, anhydrous 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,分子生物學(xué)級(jí)
Humandynamin2,DNM2ELISAKit 人發(fā)動(dòng)蛋白2(DNM2)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝 DL-蘋果酸 DL-Malic acid 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
Human11-dehydro-thromboxaneB2,11-DH-TXB2ELISA試劑盒人11去氫血栓烷B2(11-DH-TXB2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 硫酸亞鐵七水(AR) Iron(II) sulfate, heptahydrate 質(zhì)量規(guī)格:AR,>99%
真菌/酵母細(xì)胞線粒體分離(活性)試劑盒10 三鉀 Potassium phosphate, tribasic 質(zhì)量規(guī)格:>98%
MouseAquaporin4,AQP-4ELISAKit小鼠水通道蛋白4(AQP-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 鈣黃綠素二鈉鹽 Calcein, salt 質(zhì)量規(guī)格:IND grade
小鼠牛小腸堿性0酸酶(CIAP)ELISA試劑盒 ,英文名: CIAP ELISA Kit 植酸鈉 Phytic acid dodeca salt hydrate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
小鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit 96T/48T 菊粉;菊糖 Inulin from chicory 質(zhì)量規(guī)格:>90%,BR
人肺炎衣原體抗體(Cpn-Ab)試劑盒 Human Chlamydia pneumoniae aibody,Cpn-Ab ELISA Kit 孔雀綠 Malachite green 質(zhì)量規(guī)格:IND grade
RatLeptin,LEPELISAKit大鼠瘦素(LEP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 聚乙二醇2000 PEG 2000 質(zhì)量規(guī)格:M.W:2000
COLLAGENII蛋白共沉淀分析試劑盒5 硫代氨基脲(AR) Thiosemicarbazide 質(zhì)量規(guī)格:AR,>98%
MouseMyoglobin,MYO/MBELISA試劑盒小鼠肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 氯化亞鐵四水(AR) Iron (II) chloride, tetrahydrate 質(zhì)量規(guī)格:AR,>99%
大鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞操作頂體形態(tài)刀A凝集素?zé)晒鈽?biāo)記(ConA-FITC)染色試劑盒20 靈芝酸 B Ganoderic acid B 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
頂體形態(tài)花生凝集素?zé)晒鈽?biāo)記(PNA-FITC)染色試劑盒20 靈芝醛A(標(biāo)準(zhǔn)品) Ganoderal A 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥95%,標(biāo)準(zhǔn)品
頂體形態(tài)豌豆凝集素?zé)晒鈽?biāo)記(PSA-FITC)染色試劑盒20 靈芝醛A HPLC≥98% 20mg
動(dòng)物扁桃腺組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒10 靈芝內(nèi)酯B HPLC≥98% 20mg
動(dòng)物垂體組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒10 靈芝馬酮 HPLC≥98% 5mg
動(dòng)物單酚氧化酶(monophenolase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20 靈芝醇F HPLC≥98% 5mg
動(dòng)物單核白細(xì)胞/細(xì)胞分離試劑盒10 靈芝醇A HPLC≥98% 5mg
動(dòng)物多酚氧化酶(polyphenoloxidase;PPO)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20 靈芝醇 B HPLC≥98% 5mg
動(dòng)物多核白細(xì)胞分離試劑盒10 膦酰二肽鈉 Phosphoramidon di salt 質(zhì)量規(guī)格:0.99
動(dòng)物二酚氧化酶(diphenolase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20 磷脂酶A2激活肽 Phospholipase A2 ActivatingPeptide 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR