注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的)。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號(hào) | CS-963832 |
小鼠腹腔巨噬細(xì)胞【Mouse Peritoneal:Peritoneal Macrophages】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說(shuō)明書(shū)及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒(méi)有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)ELISA試劑盒 ,英文名: visfatin ELISA Kit 嗎多明 Molsidomine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
小鼠能a1A受體(ADRA1A)ELISA檢測(cè)試劑盒Mouseadrenergicalpha-1Areceptor,ADRA1A 96T/48T 嗎多明(標(biāo)準(zhǔn)品) Molsidomine 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
小鼠能a1A受體(ADRA1A)ELISA試劑盒 ,英文名: ADRA1A ELISA Kit O,P-滴滴滴(標(biāo)準(zhǔn)品) Mitotane;O,P'-DDD 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
小鼠尼克酰胺-N-轉(zhuǎn)移酶(NNMT)ELISA試劑盒 ,英文名: NNMT ELISA Kit 尿嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品) Uracil 質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測(cè)定
小鼠尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸0酸氧化酶1(NOX1)ELISA試劑盒 ,英文名: NOX1 ELISA Kit 尿嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品) Uracil 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
小鼠尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸0酸氧化酶4(NOX4)ELISA試劑盒 ,英文名: NOX4 ELISA Kit 丙胺肽林(標(biāo)準(zhǔn)品) Propantheline bromide 質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測(cè)定
小鼠黏膜地址素細(xì)胞黏附分子(MAdCAM1)ELISA試劑盒 ,英文名: MAdCAM1 ELISA Kit 鹽酸妥洛特羅(標(biāo)準(zhǔn)品) Tulobuterol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測(cè)定
小鼠鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶激活因子2A(GUCA2A)ELISA試劑盒 ,英文名: GUCA2A ELISA Kit 無(wú)水氫二鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) N-(Isoxazol-5-yl)sulphanilamide 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
小鼠鳥(niǎo)酸脫羧酶(ODC)ELISA試劑盒 ,英文名: ODC ELISA Kit 鹽酸拉貝洛爾(標(biāo)準(zhǔn)品) Labetalol 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 水楊酰胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Salicylamide 質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測(cè)定
HumanAprotinin,APELISAKit 人抑肽酶(AP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝 鹽酸氟西汀 Fluoxetine 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
DuckIerleukin-4,IL-4ELISA試劑盒鴨白介素4(IL-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 鹽酸氟西?。?biāo)準(zhǔn)品) Fluoxetine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
藻類菌脂質(zhì)綠色熒光染色試劑盒20 馬來(lái)酸氟伏沙明 Fluvoxamine maleate 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BP2007
MouseCytochrome-C,Cyt-CELISAKit小鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 馬來(lái)酸氟伏沙明(標(biāo)準(zhǔn)品) Fluvoxamine maleate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠瘦素受體(Leptin receptor)ELISA試劑盒 ,英文名: Leptin receptor ELISA Kit 福美斯坦 Formestane 質(zhì)量規(guī)格:>99%
牛分泌型球蛋白A(sIgA)ELISA檢測(cè)試劑盒BovinesecretoryimmunoglobulinA,sIgAELISAKit 96T/48T 福美斯坦(標(biāo)準(zhǔn)品) Formestane 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98.0%,標(biāo)準(zhǔn)品
人6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)試劑盒 Human 6-keto-prostaglandin F1a,6-K-PGF1a ELISA Kit 福辛普利鈉 Fosinopril 質(zhì)量規(guī)格:度≥99.0%(HPLC)
英文名稱MouseIerleukin-15,IL-15ELISAKIT小鼠白介素-15(IL-15)規(guī)格:96T/48T 呋塞米(速尿) Furosemide 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
冰凍切片組織PASE-4蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 呋塞米(標(biāo)準(zhǔn)品) Furosemide 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
RatcoagulationfactorⅢ,FⅢELISA試劑盒大鼠凝血因子Ⅲ(FⅢ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 吉非羅齊 Gemfibrozil 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
小鼠腹腔巨噬細(xì)胞操作大鼠遲現(xiàn)抗原(VLA)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratverylateappearingaigen,VLAELISAKit 96T/48T 鎳標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶劑:1%硝酸) Nickel standard 質(zhì)量規(guī)格:500mg/L,溶劑:1%硝酸
大鼠雌二醇(E2)ELISA檢測(cè)試劑盒RatEsadiol,E2ELISAKit 96T/48T 鎳標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/mL,基體:1%HNO3) Nickel Standard 質(zhì)量規(guī)格:100μg/mL,基體:1%HNO3
大鼠雌二醇受體(ER)ELISA檢測(cè)試劑盒ratEsadiolreceptor,ERELISAKit 96T/48T 脲,尿素 Urea 質(zhì)量規(guī)格:AR
大鼠雌激素(E)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratesogen,EELISAKit 96T/48T 尿胰蛋白酶抑制劑 Urinary trypsin inhibitor fragment 質(zhì)量規(guī)格:>95% (HPLC),BC
大鼠雌激素受體(ER)ELISA檢測(cè)試劑盒RatEsogeeceptor,ERELISAKit 96T/48T 尿酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Uric acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠雌三醇(E3)ELISA檢測(cè)試劑盒RatEsiol,E3ELISAKit 96T/48T 尿酸 Uric acid 質(zhì)量規(guī)格:0.99
大鼠促黃體激素(LH)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratleoopichormone,LHELISAKit 96T/48T 尿素酶,脲酶(巨豆) Urease 質(zhì)量規(guī)格:>45 U/mg,進(jìn)分
大鼠促甲狀腺素(TSH)ELISA檢測(cè)試劑盒RatThyroidStimulatingHormone,TSHELISAKit 96T/48T 尿素(標(biāo)準(zhǔn)品) Urea 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
大鼠促甲狀腺素釋放激素(H)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratthyroopin-releasinghormone,HELISAKIT 96T/48T 尿素 HPLC≥98% 50mg
大鼠促卵泡素(FSH)ELISA檢測(cè)試劑盒ratfollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit 96T/48T 尿皮質(zhì)激素Ⅲ,小鼠 Urocortin III, mouse 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR