實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：玉米內(nèi)標準hmg-A基因PCR試劑盒
貨號:CP96931
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
以下是玉米內(nèi)標準hmg-A基因PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human LAMA3(Laminin subunit alpha-3) ELISA Kit資源名稱紅菇種屬:Russula│lepida Fr.分離基物:組織塊
Human PCBP1(Poly(rC)-binding protein 1) ELISA Kit資源名稱燕麥鐮刀菌種屬:Gibberella│avenacea R.J. Cook分離基物:小麥莖
Human MOCOS(Molybdenum cofactor sulfurase) ELISA Kit資源名稱肉色杯傘種屬:Infundibulicybe│geotropa (Bull.) Harmaja提供形式:斜面培養(yǎng)物
Human PRLR(Prolactin receptor) ELISA Kit資源名稱白鱗蘑菇種屬:Agaricus│bernardii Quél.分離基物:子實體
Human PRLHR(Prolactin-releasing peptide receptor) ELISA Kit資源名稱蘋果生鏈格孢種屬:Alternaria│pomicola A.S. Horne提供形式:斜面培養(yǎng)物
Human Adcyap1(Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide) ELISA Kit資源名稱梭孢環(huán)柄菇種屬:Lepiota│magnispora Murrill分離基物:組織塊
Human ADCY10(Adenylate cyclase type 10) ELISA Kit資源名稱土黃錐蓋菇種屬:Conocybe│subovalis Kuhner & Watling分離基物:菌蓋或菌柄
Human METRN(Meteorin) ELISA Kit資源名稱亞灰光柄菇種屬:Pluteus│subcervinus (Berk. & Broome) Sacc.分離基物:菌蓋或菌柄
Human PPP2R4(Serine/threonine-protein phosphatase 2A activator) ELISA Kit資源名稱黑紫紅菇種屬:Russula│atropurpurea (Krombh.) Britzelm.分離基物:菌蓋或菌柄
Human REL(Proto-oncogene c-Rel) ELISA Kit資源名稱多形炭角菌（斜面）種屬:Xylaria polymorpha (Pers.) Grev.分離基物:子實體
Human ADCY1(Adenylate cyclase type 1) ELISA Kit資源名稱腐皮殼屬種屬:Valsa│ceratosperma (Tode) Maire分離基物:梨
Human PINK1(Serine/threonine-protein kinase PINK1, mitochondrial) ELISA Kit資源名稱灰略紅鏈霉菌種屬:Streptomyces│griseorubens (Preobrazhenskaya et al) Pridham et a分離基物:土壤
Human PYCARD(Apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD) ELISA Kit資源名稱維及尼鏈霉菌種屬:Streptomyces│virginiae Grundy et al分離基物:土壤
Human LNPEP(Leucyl-cystinyl aminopeptidase) ELISA Kit資源名稱褐囊蜜環(huán)菌種屬:Armillaria│bruneocystidia H.C. Wang，G.F. Qin & J. Zhao分離基物:杜鵑花屬
Human LMX1B(LIM homeobox transcription factor 1-beta) ELISA Kit資源名稱綠孢環(huán)柄菇種屬:Chlorophyllum│molybdites (G. Mey.) Massee分離基物:子實體
Human AHR(Aryl hydrocarbon receptor) ELISA Kit資源名稱可可毛色二孢菌種屬:Lasiodiplodia│theobromae (Pat.) Griffon & Maubl.分離基物:水黃皮莖
Human ROR2(Tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR2) ELISA Kit資源名稱白紋羽菌種屬:Rosellinia│necatrix Berl. ex Prill.分離基物:茶樹病根
Human LELP1(Late cornified envelope-like proline-rich protein 1) ELISA Kit資源名稱雷氏青霉種屬:Penicillium│raistrickii G. Sm.分離基物:葡萄
Human RIPK3(Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 3) ELISA Kit資源名稱根柄白蟻傘種屬:Termitomyces│radicatus Natarajan分離基物:子實體
Human ALOX5(Arachidonate Lipoxygenase 5) ELISA Kit資源名稱茄腐鐮刀菌（斜面）種屬:Haematonectria haematococca (Berk. & Broome) Samuels & Rossman分離基物:根部
玉米內(nèi)標準hmg-A基因PCR試劑盒LFA-2|CD2(T-cell surface antigen CD2)|T11|CD2 antigen|CD2 antigen(p50)|sheep red blood cell receptor|CD2 molecule|Erythrocyte receptor|FLJ46032|LFA-2|LFA-3 receptor|lymphocyte-function antigen-2|Rosette receptor|SRBC|T11|T-cell surface antigen CD2形態(tài)特性 淋巴母細胞生長特性 懸浮生長特征特性 ARH-77細胞株的快速生長突變株HMy.2 B用γ射線照射，選擇HLA I型抗原表達缺失的細胞，得到HMy2.CIR細胞株。 這株細胞不表達HLA A位點和B位點的產(chǎn)物，但表達少量HLA Cw4。 這株細胞適于用作I型主要組織相容性抗原基因的轉(zhuǎn)染宿主。 有報道稱ARH-77細胞株呈EB核抗原陽性(EBNA+)和EB病毒莢膜抗原陽性(EBVCA+)。 由于Hmy2.CIR細胞株起源于ARH-77細胞株的快速生長突變株HMy.2 B，推測它也是EBNA+。 培養(yǎng)條件 IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium 優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
CD99(Cluster of Differentiation 99)|MIC2|pilr-1|PILR-L|12E7|antigen identified by monoclonal antibodies 12E7|F21 and O13|CD99 antigenY homolog|CD99 molecule|E2 antigen|HBA71|MIC2(monoclonal 12E7)|MIC2Y|MSK5X|Protein MIC2|surface antigen MIC2|T-cell surface glycoprotein E2形態(tài)特性 淋巴母細胞生長特性 懸浮生長特征特性 NK-92是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細胞衍生來的一株白細胞介素-2依賴型NK細胞株。 NK-92MI是轉(zhuǎn)染得到的源自NK-92的IL-2非依賴的NK細胞株。 親本細胞通過微粒體基因轉(zhuǎn)化法用逆轉(zhuǎn)錄病毒MFG-hIL-2載體攜帶的人IL-2 cDNA進行轉(zhuǎn)化。 可能由于載體整合到基因組DNA中，轉(zhuǎn)化是穩(wěn)定的。 這株細胞對很多惡性細胞有細胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562和Daudi細胞。 NK-92細胞有以下特征： CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, 培養(yǎng)條件 α－MEM：Alpha Minimum Essential Medium (with Nucleosides) 馬血清， 12.5%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，12.5%
5'-nucleotidase|5'-NT|Ecto-5'-nucleotidase|CD73|NT5E|NT5|NTE形態(tài)特性 上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性 培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
AAA|Anti-Albumin Antibody形態(tài)特性 上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性 這株細胞是2001年從人胚腎細胞株293衍化而來。293細胞用攜帶Zeocin-抗性標記的質(zhì)粒pVgRXR轉(zhuǎn)染得到293pVgRXR細胞。 隨后, 用包含編碼E4 24K的Ad5 E4 ORF6基因的質(zhì)粒pEKORF6轉(zhuǎn)染。pEKORF6從包含潮霉素抗性基因的質(zhì)粒pIndHydro衍生而來。 載體包含SV40病毒序列。 2V6.11細胞株Z初從含潮霉素的培養(yǎng)液中用克隆環(huán)分離單克隆得到。 2V6.11細胞誘導(dǎo)表達的人腺病毒E4 34KDa蛋白可通過免疫印跡法檢測。 這株細胞可以用作研究腺病毒E4癌基因的工具 培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
AAHA|Anti-Apolipoprotein Antibody|anti-β2 glycoprotein I antibodies形態(tài)特性 上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性 從一位非癌個體的正常人支氣管上皮病理切片分離出上皮細胞。 這些細胞用腺病毒12-SV40病毒雜交病毒感染并克隆。 DEAS-2B細胞保留了對血清反應(yīng)進行鱗關(guān)分化的能力，并有用于篩選誘導(dǎo)或影響分化及致癌的化學(xué)或生物制劑。 細胞角蛋白及SV40抗原染色陽性。 培養(yǎng)條件
Multidrug resistance-associated protein 5|ATP-binding cassette sub-family C member 5|Multi-specific organic anion transporter C|MOAT-C|SMRP|pABC11|ABCC5|MRP5形態(tài)特性 成纖維細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性 培養(yǎng)條件 F12K 優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
ATP-binding cassette sub-family G member 1|ATP-binding cassette transporter 8|White protein homolog|ABCG1|ABC8|WHT1形態(tài)特性 成纖維細胞生長特性 貼壁生長特征特性 W.W. Nichols及其同事從一位16周女嬰的肺中取材，建立了人二倍體成纖維細胞株IMR-90。 [22381] 分裂潛能，病毒感受性和其它性質(zhì)都得到了充分研究，因而這株細胞可以作為WI-38或其它標準人肺細胞株的替代株。 有報道稱這株細胞在表現(xiàn)出衰老前可倍增58次。 [22381] 培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
ACA-IgG|anti-Cardiolipin Antibody IgG形態(tài)特性 成纖維細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性 培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
