參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：大麥內(nèi)標準PKABA1基因PCR試劑盒
貨號:CP96880
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。

以下是大麥內(nèi)標準PKABA1基因PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Chicken CNTF(Ciliary Neurotrophic Factor) ELISA Kit資源名稱法國蜜環(huán)菌（斜面）種屬:Armillaria gallica提供形式:斜面培養(yǎng)物/凍干物

Chicken ACHE(Acetylcholinesterase) ELISA Kit資源名稱擴展青霉（斜面）種屬:Penicillium expansum分離基物:水果

Chicken CRP(C-reactive protein) ELISA Kit資源名稱淡紫擬青霉（斜面）種屬:Paecilomyces lilacinus提供形式:凍干物

Chicken c/TNNT2(Troponin T Type 2, Cardiac) ELISA Kit資源名稱腐生葡萄球菌腐生亞種種屬:Staphylococcus saprophyticus subsp. saprophyticus提供形式:凍干物

Chicken FSH(Follicle-Stimulating Hormone) ELISA Kit資源名稱串珠鐮刀菌（斜面）種屬:Fusarium moniliforme分離基物:野燕麥

Chicken GC(Glucagon) ELISA Kit資源名稱緩慢葡萄球菌種屬:Staphylococcus lentus提供形式:凍干物

Chicken IFN-α(Interferon α) ELISA Kit資源名稱食酸菌屬種屬:Acidovorax sp.分離基物:西沙諾尼成熟果種子內(nèi)

Chicken IFN-β(Interferon Beta) ELISA Kit資源名稱噬瓊膠海水菌種屬:Aquimarina agarlyticus sp. nov.分離基物:石花菜

Chicken IFN-γ(Interferon Gamma) ELISA Kit資源名稱梭形芽孢桿菌屬種屬:Lysinibacillus│sp.分離基物:變味的醋

Chicken IGF-2(Insulin Like Growth Factor 2) ELISA Kit資源名稱枯草芽孢桿菌黑色變種種屬:Bacillus│subtilis var. niger提供形式:斜面培養(yǎng)物

Chicken IGFBP-1(Insulin Like Growth Factor Binding Protein 1) ELISA Kit資源名稱球毛殼（斜面）種屬:Chaetomium globosum提供形式:斜面培養(yǎng)物

Chicken IGFBP-3(Insulin Like Growth Factor Binding Protein 3) ELISA Kit資源名稱腸沙門氏菌腸亞種嬰兒血清型種屬:Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis提供形式:凍干物

Chicken IGFBP-4(Insulin Like Growth Factor Binding Protein 4) ELISA Kit資源名稱野油菜黃單胞菌種屬:Xanthomonas campestris提供形式:凍干物

Chicken IgY(Immunoglobulin Y) ELISA Kit資源名稱鼠乳桿菌種屬:Lactobacillus murinus分離基物:小鼠腸道

Chicken IL-10(Interleukin-10) ELISA Kit資源名稱致病性大腸埃希氏菌種屬:Escherichia coli EPEC 026:K60分離基物:烤串

Chicken IL-12 p40(Interleukin 12 p40) ELISA Kit資源名稱假單胞桿菌種屬:Pseudomonas spices提供形式:凍干粉

Chicken IL-13(Interleukin 13) ELISA Kit資源名稱雪腐鐮刀菌（斜面）種屬:Fusarium nivale分離基物:雪腐病小麥

Chicken IL-15(Interleukin 15) ELISA Kit資源名稱林肯鏈霉菌種屬:Streptomyceslincolnensis分離基物:土壤

Chicken IL-16(Interleukin 16) ELISA Kit資源名稱摩氏摩根菌種屬:morganella morganii提供形式:凍干粉

Chicken IL-17(Interleukin 17) ELISA Kit資源名稱腸道侵襲性大腸埃希氏菌種屬:Escherichia coli EIEC提供形式:凍干粉
大麥內(nèi)標準PKABA1基因PCR試劑盒TL-3蠟樣芽孢桿菌顯色瓊脂平板產(chǎn)品用途：蠟樣芽孢桿菌顯色瓊脂平板用于食品樣本中蠟樣芽孢桿菌的快速分離和初步鑒別(含添加劑)。(GB)產(chǎn)品規(guī)格：90mmX20個冷藏：2-8℃

D amino acid oxidase|DAAO|DAMOX|DAO|OXDA胰酪胨大豆多粘菌素B肉湯產(chǎn)品用途：胰酪胨大豆多粘菌素B肉湯用于蠟樣芽孢桿菌前增菌或MPN法檢驗。（GB)產(chǎn)品規(guī)格：225mlX6瓶冷藏：2-8℃

PTGES3(Prostaglandin E synthase 3)|p23|CPGES|TEBP|cPGES|Cytosolic prostaglandin E2 synthase|Hsp90 co-chaperone|Progesterone receptor complex p23|prostaglandin E synthase 3(cytosolic)|Telomerase-binding protein p23|unactive progesterone receptor|23 kD胰酪胨大豆羊血瓊脂平板TSSB產(chǎn)品用途：胰酪胨大豆羊血瓊脂平板TSSB用于蠟樣芽孢桿菌的溶血性試驗。(GB)產(chǎn)品規(guī)格：90mmX20個冷藏：2-8℃

Activator protein 1|AP 1|AP1|c Jun|JUN|jun oncogene|P39|Proto oncogene c Jun|Transcription factor AP 1錳鹽營養(yǎng)瓊脂平板產(chǎn)品用途：錳鹽營養(yǎng)瓊脂平板用于嗜溫和嗜熱需氧芽孢桿菌的檢測。(GB)產(chǎn)品規(guī)格：90mmX20個冷藏：2-8℃

FG 改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨-萬古霉素肉湯(Mlst-Vm)產(chǎn)品用途：改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨-萬古霉素肉湯(Mlst-Vm)用于阪崎腸桿菌的選擇性增菌培養(yǎng)。(GB)產(chǎn)品規(guī)格：10mlX20支冷藏：2-8℃

Osteocalcin10%胰蛋白胨大豆肉湯產(chǎn)品用途：10%胰蛋白胨大豆肉湯用于金黃色葡萄球菌的多管發(fā)酵法測定及增菌培養(yǎng)。(GB)產(chǎn)品規(guī)格：10mlX20支冷藏：2-8℃

Parathyroid hormone阪崎腸桿菌顯色瓊脂平板產(chǎn)品用途：阪崎腸桿菌顯色瓊脂平板用于嬰兒奶粉以及其他食品中的阪崎腸桿菌的快速鑒定和計數(shù)。(GB、ISO)產(chǎn)品規(guī)格：90mmX20個冷藏：2-8℃

ALOX12多粘菌素B肉湯產(chǎn)品用途：多粘菌素B肉湯用于副溶血性弧菌選擇性增菌培養(yǎng)。(SN)產(chǎn)品規(guī)格：10mlX20支冷藏：2-8℃