實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：水稻內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)SPS基因PCR試劑盒
貨號:CP96901
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。

以下是水稻內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)SPS基因PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human STH(Saitohin) ELISA Kit資源名稱費氏志賀氏菌種屬:Shigella flexneri提供形式:凍干粉

Human SERPINA7(Thyroxine-binding globulin) ELISA Kit資源名稱大豆根瘤菌種屬:Bradyrhizobiumjaponicum(Kirchner)Jordan提供形式:凍干粉

Human BIRC6(Baculoviral IAP repeat-containing protein 6) ELISA Kit資源名稱冰核細(xì)菌種屬:INAbacteria安全等級:1

Human SLC2A13(Proton myo-inositol cotransporter) ELISA Kit資源名稱陰溝腸桿菌種屬:Escherichia cloacae提供形式:凍干粉

Human SLC12A1(Solute carrier family 12 member 1) ELISA Kit資源名稱產(chǎn)氣腸桿菌種屬:Enterobacter aerogenes分離基物:痰液

Human DEFB4A(Beta-defensin 4A) ELISA Kit資源名稱熒光假單胞菌種屬:Pseudomonas fluorescens Migula提供形式:凍干粉

Human SLC8A1(Sodium/calcium exchanger 1) ELISA Kit資源名稱南方樹舌種屬:Ganoderma│australe (Fr.) Pat.分離基物:子實體

Human SLC11A2(Natural resistance-associated macrophage protein 2) ELISA Kit資源名稱木層孔菌種屬:Phellinussp.安全等級:1

Human SLC25A12(Calcium-binding mitochondrial carrier protein Aralar1) ELISA Kit資源名稱平蓋靈芝（樹舌）種屬:Ganodermaapplanatum(Pers.exWullr)Pat.安全等級:1

Human SLC25A13(Calcium-binding mitochondrial carrier protein Aralar2) ELISA Kit資源名稱冬蟲夏草種屬:Ophiocordyceps│sinensis分離基物:冬蟲夏草

Human SLC30A8(Zinc transporter 8) ELISA Kit資源名稱蟲草種屬:Cordycepssp.安全等級:1

Human UBAP2(Ubiquitin-associated protein 2) ELISA Kit資源名稱臥孔菌種屬:Poriasp.安全等級:1

Human CDC42(Cell division control protein 42 homolog) ELISA Kit資源名稱蜜粘褶菌=革裥菌種屬:Gloeophyllumtrabeum(Pers.)Murr.=Lenzitestrabea(Pers.)Fr.安全等級:1

Human FSCN2(Fascin-2) ELISA Kit資源名稱雞腿蘑（毛頭鬼傘）種屬:Coprinuscomatus(Mull.exFr.)Gray安全等級:1

Human REG3γ(RegeneRating Islet Derived Protein 3 Gamma) ELISA Kit資源名稱金針菇種屬:Flammulina│velutipes提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human S1PR2(Sphingosine 1-phosphate receptor 2) ELISA Kit資源名稱珊瑚色諾卡氏菌種屬:Nocardia coralline提供形式:凍干物

Human S1PR3(Sphingosine 1-phosphate receptor 3) ELISA Kit資源名稱蠣灰鏈霉菌種屬:Streptomycessp.安全等級:1

Human S1PR4(Sphingosine 1-phosphate receptor 4) ELISA Kit資源名稱淡天藍(lán)色鏈霉菌種屬:Streptomycescoelicolor(Preobrazhenskaya)Pridham.HesseltineetBenedict安全等級:1

Human S1PR5(Sphingosine 1-phosphate receptor 5) ELISA Kit資源名稱抗生鏈霉菌種屬:Streptomyces antibioticus (Waksman et Woodruff) Waksman et Henrici提供形式:凍干粉

Human IL31RA(Interleukin-31 receptor subunit alpha) ELISA Kit資源名稱大麗花輪枝孢種屬:Verticillium│dahliae分離基物:棉花
水稻內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)SPS基因PCR試劑盒ANGPTL4(Angiopoietin Like Protein 4)|ARP4|FIAF|HFARP|NL2|PGAR|pp1158過氧化氫酶試劑產(chǎn)品規(guī)格：10支/盒

AZU1(Azurocidin 1)|AZAMP|AZU1|CAP37|HBP|AZAMP|AZU|azurocidin|azurocidin 1|Azurocidin|Cationic Antimicrobial Protein-37|Heparin Binding Protein膽汁液態(tài)培養(yǎng)基用途：膽汁液態(tài)培養(yǎng)基用于飲用天然礦泉水中糞鏈球菌濾膜法的確證實驗。(GB/T8538-2008)原理：

BAFF|CD257|TNFSF13B|BLYS|TALL1|THANK|TNFSF20|ZTNF4腦-心浸萃瓊脂培養(yǎng)基用途：腦-心浸萃瓊脂培養(yǎng)基廣泛用于霉菌、酵母、細(xì)菌的培養(yǎng)，包括營養(yǎng)要求較高的微生物的培養(yǎng)，特別用于礦泉水和城市供水中糞性鏈球菌濾膜法的確證性實驗(GB/T8538-2008和CJ/T148-2001)。原理：

BDNF(Brain Derived Neurotrophic Factor)|ANON2|BULN2|Abrineurin|neurotrophin腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基用途：腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基廣泛用于霉菌、酵母、細(xì)菌的培養(yǎng)，包括營養(yǎng)要求較高的微生物的培養(yǎng)，特別用于飲用天然礦泉水和城市供水中糞性鏈球菌濾膜法的確證性實驗(GB/T8538-2008，SN/T2206.4-2009和CJ/T148-2001)。原理：

BTC(Betacellulin)|bTCKF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基用途：KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基用于糞性鏈球菌濾膜法選擇性培養(yǎng)和計數(shù)(GB/T8538-2008，SN/T2206.5-2009和CJ/T148-2001)。原理：

BMP-2(Bone Morphogenetic Protein 2)|BMP2A|BMP-2A乳糖蛋白胨培養(yǎng)液用途：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液用于水中多管發(fā)酵法或濾膜法測定大腸菌群(GB/T5750.12-2006和GB/T8538-2008)。原理：

BMP-4|BMP2B|BMP2B1|MCOPS6|ZYME|DVR4|OFC11|ZYME亮綠乳糖培養(yǎng)液(BGB)用途：亮綠乳糖培養(yǎng)液(BGB)用于多管發(fā)酵法測定飲用礦泉水中大腸菌群的確證試驗(GB/T8538-2008)。原理：

BMP-5(Bone Morphogenetic Protein 5)品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基(遠(yuǎn)藤瓊脂培養(yǎng)基)用途：品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基(遠(yuǎn)藤瓊脂培養(yǎng)基)用于水中大腸菌群的分離或確證試驗。(GB/T8538-2008和GB5750.12—2006)。原理：