注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱 | 人肺大靜脈內(nèi)皮細胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963712 |
人肺大靜脈內(nèi)皮細胞【Human Lung: Pulmonary Vein Endothelial Cells】產(chǎn)品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。提供的細胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
雞可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA檢測試劑盒ChickenSolubleIercellularAdhesionMolecule-1,sICAM-1 96T/48T 氯化金 Gold (III) chloride tetrahydrate 質(zhì)量規(guī)格:BC
雞可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA檢測試劑盒ChickensolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCR 96T/48T 石墨粉(>99%,BR) Graphite powder 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
雞流行性乙型腦炎抗體IgG(JEIgG)ELISA檢測試劑盒ChickenJapaneseEncephalitisIgG,JEIgG 96T/48T 己二醇(>98%,BR) Hexylene glycol 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
雞硫酸類肝素(HS)ELISA檢測試劑盒Chickenheparansulfate,HS 96T/48T 六甲基磷酰三胺(>98%,BR) HMPA, hexamethylphosphoramide 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
雞酶(CA)ELISA檢測試劑盒Chickencarbonicanhydrase,CA 96T/48T 還原茚三酮二水合物(>98%,BR) Hydrindantin hydrate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
雞核糖核酸(Irna)ELISA檢測試劑盒ChickenImmuneRNA,Irna 96T/48T 中粘度羥丙基纖維素 Hydroxypropyl cellulose 質(zhì)量規(guī)格:4000~6500 mpa.s,BR
雞球蛋白G(IgG)ELISA檢測試劑盒ChickenImmunoglobulinG,IgG 96T/48T 3-吲哚基-beta-D-吡喃半乳糖苷(>98%(TLC),BR) Indoxyl-Gal 質(zhì)量規(guī)格:>98%(TLC),BR
雞熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA檢測試劑盒ChickenHeatShockProtein20,HSP-20 96T/48T 3-吲哚基-beta-D-葡糖苷酸環(huán)已胺鹽(>98%(HPLC),BR) Indoxyl-Glucuronide 質(zhì)量規(guī)格:>98%(HPLC),BR
雞熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA檢測試劑盒ChickenHeatShockProtein40,HSP-40 96T/48T 代苯(>98%,醫(yī)藥級) Iodobenzene 質(zhì)量規(guī)格:>98%,醫(yī)藥級
雞熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA檢測試劑盒ChickenHeatShockProtein60,HSP-60 96T/48T 硫化鐵 (II)(>70%,BR) Iron (II) sulfide 質(zhì)量規(guī)格:>70%,BR
小鼠活化素A(Activin-A)ELISA檢測試劑盒MouseActivinAELISAKit 96T/48T 苦瓜皂苷 C HPLC≥95% 20mg
人核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)試劑盒 Human ai-fibrillarin aibody,AFA/snoRNP/U3RNP ELISA Kit (E)阿魏酸乙酯 HPLC≥98% 20mg
RatdipeptidylpeptldaseⅣ,DPPⅣELISAKit大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 香葉基,,','四羥基黃酮 HPLC≥95% 20mg
4%多聚甲固著液50毫升 香葉基,,','四羥基黃酮 HPLC≥95% 20mg
Mouseeosinophilcationicprotein,ECPELISA試劑盒小鼠嗜酸性粒細胞陽離子蛋白(ECP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 高黃綠酸 HPLC≥95% 20mg
小鼠無翅型MMTV整合位點家族成員5A(W5A)ELISA試劑盒 ,英文名: W5A ELISA Kit 桑辛素 T HPLC≥95% 20mg
兔抗糖蛋白抗體(GP)ELISA檢測試劑盒Rabbitai-glycoproteinaibody,GPELISAKit 96T/48T 桑辛素 M HPLC≥95% 20mg
牛心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)試劑盒 Bovine cardiac oponin I,cTn-I ELISA kit beta鼠李素 HPLC≥95% 20mg
英文名稱HumanainuclearaibodyELISAKIT人抗核抗體(ANA)規(guī)格:96T/48T 羥基彌羅松酚 HPLC≥95% 20mg
地生蘭(terresial)移植維護培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑 荷包牡丹堿 HPLC≥95% 20mg
人肺大靜脈內(nèi)皮細胞操作RatFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISAKit大鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石蕊 Litmus 質(zhì)量規(guī)格:AR
RatFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISA試劑盒大鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石蕊 Litmus 質(zhì)量規(guī)格:AR
RatFattyacyl-CoAsyhetase,ACSELISAKit大鼠脂酰輔酶A合成酶(ACS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石墨粉(>99%,BR) Graphite powder 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
RatFattyacyl-CoAsyhetase,ACSELISA試劑盒大鼠脂酰輔酶A合成酶(ACS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石榴皮鞣素(標(biāo)準(zhǔn)品) Punicalin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
RatFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISAKiatFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISAKit大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石榴皮鞣素 HPLC≥98% 10mg
RatFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISA試劑盒RatFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISA試劑盒大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石蠟油 Paraffin oil, light fraction 質(zhì)量規(guī)格:分子生物學(xué)級,PCR Grade
Ratferritin,FEELISAKit大鼠鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石斛堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Dendrobine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品
Ratferritin,FEELISA試劑盒大鼠鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石斛堿 HPLC≥98% 20mg
RatFibrinogen,FbgELISAKit大鼠血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石斛酚(標(biāo)準(zhǔn)品) dendrophenol 質(zhì)量規(guī)格:鑒別
RatFibrinogen,FbgELISA試劑盒大鼠血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石斛酚 HPLC≥95% 20mg