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漿蛋白提取試劑盒(無去垢劑)100T實驗方法

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更新時間:2017-07-10 12:30:47瀏覽次數(shù):211次

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漿蛋白提取試劑盒(無去垢劑)100T實驗方法注意事項
1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
7PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
漿蛋白提取試劑盒(無去垢劑)100T實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
1)取 1060 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
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NOV Protein Canine 重組狗 CCN3 / NOV 蛋白 (His 標簽)

大鼠腎實質細胞*培養(yǎng)基 100mL

IgG3 Others Human IgG3-Fc / IGHG3 人細胞裂解液 (陽性對照)

CTLA4 Ig-24中國倉鼠卵巢細胞 CTLA4 Ig-24 China hamster ovary cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS

心室肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

G1(發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細胞) 5×106cells/瓶×2 大鼠小膠質細胞RM
腦動脈血管平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

CNTN2 Others Mouse 小鼠 Contactin 2 / CNTN2 人細胞裂解液 (陽性對照)

大鼠主動脈內皮細胞*培養(yǎng)基 100mL

PC-12(高分化)大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化) PC-12 (high differentiation) rat pheochromocytoma cells (high differentiation) RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS

IFNA8 Protein Human 重組人 Interferon alpha-B / IFNA8 蛋白 (His 標簽)

HHCC(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 粘質沙雷伯氏菌
NA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 神經(jīng)氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

人真皮成纖維細胞-新生兒cDNAHDF-n cDNA

雜交瘤(B);Z51B3C10H12A12G2F7B5

TE-10細胞,食管癌細胞 人食管癌細胞,TE-10細胞 敘利亞倉鼠腎細胞;BHK-21

小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B5

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人神經(jīng)膠質纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA檢測試劑盒Humanglialfibrillaryacidicprotein,GFAPELISAKit 96T/48T

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CLIAKitforVCAM-1/CD106(RabbitVascuolarcelladhesionmolecule1)ELISAKit兔血管內皮細胞粘附分子1規(guī)格:48T/96T

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