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改良Lowry法蛋白定量試劑盒500T實驗方法

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更新時間:2017-07-10 12:25:09瀏覽次數(shù):310次

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改良Lowry法蛋白定量試劑盒500T實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
1)取 1060 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
改良Lowry法蛋白定量試劑盒500T實驗方法注意事項
1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
7PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
FGF10 Protein Human 重組人 FGF10 蛋白

大鼠腸巨噬細胞*培養(yǎng)基 100mL

NCSTN Others Mouse 小鼠 Nicastrin / NCSTN 人細胞裂解液 (陽性對照)

R 1610倉鼠肺細胞 R 1610 hamster lung cells DMEM+10%FBS

直結腸平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

Chang liver (CCL13) (人張氏肝細胞) 5×106cells/瓶×2 人心臟微血管內皮細胞HCMEC
CM-R085大鼠表皮角化細胞*培養(yǎng)基100mL

COL9A1 Others Human COL9A1 人細胞裂解液 (陽性對照)

小鼠星形膠質細胞MA

BLO-11細胞,小鼠骨骼成纖維細胞 人腎癌Wilms細胞,G401細胞 人膀胱平滑肌細胞HBdSMC

小耳豬肺細胞;SEP-L2

NRP1 Others Human NRP1 / Neuropilin-1 人細胞裂解液 (陽性對照)
IL17RC Others Human IL17RC (aa 1-454) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

人張氏肝細胞;Chang liver

恒河猴腎細胞;RM-3

HuT78細胞,T淋巴細胞白血病細胞 惡性黑色素瘤,A375細胞 EB病毒轉化的人B淋巴細胞;HH-01

615小鼠狀肺腺癌瘤株;P615

SERPING1 Others Human SERPING1 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠克拉拉細胞蛋白(CC16) ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人神經生長因子前體(proNGF)免疫試劑盒 Human Pro-Nerve growth factor,proNGF ELISA kit

Mousehemeoxygenase2,HO-2ELISAKit小鼠血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

BAD蛋白表達西方雜交分析試劑盒5

HumanmembraneIgD,mIgDELISA試劑盒人表面膜免疫球蛋白D(mIgD)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

Humanplasminogenactivator,PLGAELISAKit人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人游離*狀腺原酸(FT3)Elisa試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human cyclin dependent kinase 5 (CDK5) ELISA Kit 人周期素依賴性激酶5(CDK5)ELISA試劑盒

Humanmetanephrine,MNELISAKit 人變腎上腺素(MN)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanintercellularadhesionmolecule2,ICAM-2ELISA試劑盒人細胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組織堿性焦磷酸酶(AlkalinePyrophosphatase)活性比色法定量檢測試劑盒20

Humankillercellimmnoglobulin-likereceptor,KIRELISAKit人殺傷細胞免疫球蛋白樣受體(KIR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
改良Lowry法蛋白定量試劑盒500T實驗方法大鼠白三烯E4(LTE4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠白三烯C4(LTC4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠白三烯B5(LTB5)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

 

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