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更新時間:2017-07-10 12:23:31瀏覽次數(shù):245次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)總蛋白提取試劑盒(無去垢劑)100T實(shí)驗(yàn)方法
酸性蛋白酶抑制劑1ml免費(fèi)代測實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
酸性蛋白酶抑制劑1ml免費(fèi)代測注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
FGF18 Protein Human 重組人 FGF18 / FGF-18 蛋白 (His 標(biāo)簽)
大鼠小腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
LAMP1 Others Rat 大鼠 LAMP1 / CD107a 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
Dami人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞 Dami human megakaryocytic leukemia cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS
人視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)細(xì)胞HRA
BT-20(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人肺動脈平滑肌細(xì)胞HPASMC
CM-H087人冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
COLEC12 Others Cynomolgus 食蟹猴 CLP1 / COLEC12 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人食道上皮細(xì)胞HEEpiC
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-C;Vero-HCV-C 人膀胱癌細(xì)胞,5637細(xì)胞 BEL-7402(肝癌細(xì)胞)
人癌細(xì)胞;MDA-MB-453
GFRA2 Others Human 人 GFRA2 / GFRα2 / GDNFRB 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
EPHB4 Others Human 人 EphB4 / HTK (aa 563-987) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人胰腺腺泡上皮癌;HPAC
RDFs, 大鼠真皮成纖維細(xì)胞
rRTEC, 大鼠腎小管上皮細(xì)胞 [CIP 104786]細(xì)胞 293 [HEK-293] (人胚腎細(xì)胞)
人T淋巴瘤轉(zhuǎn)基因細(xì)胞;Jurkat D,E
CD5 Others Mouse 小鼠 CD5 / LEU1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人神經(jīng)絲蛋白M(NF-M)免疫試劑盒 Human Neurofilament protein M,NF-M ELISA kit
MouseHeatShockProtein90,Hsp-90ELISAKit小鼠熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
AKT蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒5次
HumanMelatonin,MISA試劑盒人褪黑素(MT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanplasmin/fibrinolysin,PL/FbnELISAKit人纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人*(Protamine)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat transforming growth factor beta 1 (TGF- beta 1) ELISA Kit 大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒
Humansquamouscellcarcinomarelatedantigen,SCCAgELISAKit 人鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原(SCCAg)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humaninsulin-likegrowthfactorsbindingprotein3,IGFBP-3ELISA試劑盒人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織脊髓過氧化酶(MPO)活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測試劑盒20次
Humanlambdaimmunoglobulinlightchain,λ-IgLCELISAKit*輕鏈lambda(λ-IgLC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
酸性蛋白酶抑制劑1ml免費(fèi)代測大鼠叉頭蛋白P3(FOXP3)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠不對稱二甲基精酸(ADMA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠補(bǔ)體因子H(CFH)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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