我司磷酸化蛋白裂解100ml實(shí)驗(yàn)方法本著標(biāo)準(zhǔn)*、質(zhì)量*、服務(wù)*、信譽(yù)*的宗旨，為客戶提供輕松便捷，安全可靠的網(wǎng)上采購模式！我們將竭誠為您服務(wù),咨詢！
磷酸化蛋白裂解100ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細(xì)胞懸液每50～100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞：
（1）取 10～60 萬細(xì)胞，重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
磷酸化蛋白裂解100ml實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
（1）本試劑只適用于實(shí)驗(yàn)，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
FGF12 Protein Canine 重組狗 FGF12 蛋白

大鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

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Raji人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞 Raji human Burkitt's lymphoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS

人腎小球內(nèi)皮細(xì)胞HRGEC

AML-193(人急性單核細(xì)胞白血病單核細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人神經(jīng)細(xì)胞HN
輸尿管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

CREB3L1 Others Human 人 CREB3L1 / OASIS (aa 396-519) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

大鼠氣管上皮細(xì)胞;RTE

PG49細(xì)胞，人肺腺癌細(xì)胞系 轉(zhuǎn)S9基因倉鼠卵巢細(xì)胞,ZA1細(xì)胞 CL-0042BxPC-3(人原位胰腺腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

SVEC4-10(小鼠淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

HDLEC-c adult 人類皮膚淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞(HDLEC)來自成年捐獻(xiàn)者 500,000cells 頜下腺上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)
IL17RB Others Human 人 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人羊膜細(xì)胞;WISH

CL-0343HA(人羊膜細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

P3-NS-1/1-Ag4.1細(xì)胞，骨髓瘤細(xì)胞 人T細(xì)胞白血病細(xì)胞,6T-CEM細(xì)胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KM9402

幼蚊細(xì)胞;C6/36

SELE Others Human 人 E-Selectin / CD62E 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
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