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RIPA裂解液(2X)50ml使用說明書使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數量不以應低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
RIPA裂解液(2X)50ml使用說明書操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內,進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導細胞凋亡;
(1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當的凋亡誘導劑誘導細胞凋亡,并設立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
RIPA裂解液(2X)50ml使用說明書實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細胞;
(3)細胞洗滌:用預冷1×PBS(4℃)重懸細胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞;
(5)Annexin V-FITC標記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。
FGF9 Protein Canine 重組狗 FGF9 / FGF-9 蛋白 (Fc 標簽)
大鼠肝動脈內皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
EPHA4 Others Rat 大鼠 EphA4 人細胞裂解液 (陽性對照)
HMy2.CIR人B淋巴母細胞 HMy2.CIR human B lymphoblastoid cell IMDM培養(yǎng)基(GIBCO)+20%FBS
人滑膜細胞HS
A3(人T淋巴細胞白血病細胞) 5×106cells/瓶×2 子宮癌組織源性原代細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)/1ml
CL-0212SK-Hep-1(人肝癌細胞)5×106cells/瓶×2
CREG1 Others Mouse 小鼠 CREG / CREG1 人細胞裂解液 (陽性對照)
人表皮角質細胞-cDNAHEK-acDNA
MCF/Adr細胞,人癌*耐藥細胞株 團頭魴尾鰭細胞,WCF細胞 骨細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
2V6.11(人胚腎細胞) 5×106cells/瓶×2
HCF Pellet 人類心臟成纖維細胞團塊 > 1 mio.cells 人海馬趾星形膠質細胞裂解物HA-h L
CD3D Others Mouse 小鼠 CD3d / CD3 delta 人細胞裂解液 (陽性對照)
人羊膜細胞;WISH
人尿道上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
Neuro-2a細胞,小鼠腦神經瘤細胞 MDA-MB-231(癌細胞) 人腦瘤細胞;SF767
IL8 Protein Human 重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 6-77, Fc 標簽)
SP2/0(小鼠骨髓瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 ANTXR2 / CMG2 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠磷酸化細胞外信號調節(jié)激酶(pERK)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人神經型一氧化氮合成酶(nNOS)免疫試劑盒 Human Neuronal Nitric Oxide Synthase,nNOS ELISA Kit
MouseHaptoglobin,Hpt/HPELISAKit小鼠結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
通用型甜菜壞死黃脈病毒(BeetNecroticYellowVeinVirus;BNYVV)基因檢測試劑盒20次
Humanmelanocytestimulatinghormone,MSHELISA試劑盒人黑色素細胞刺激素(MSH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanplacentalribonucleaseinhibitor,HPRIELISAKit人胎盤核糖核酸抑止劑(HPRI)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人載脂蛋白C2(Apo-C2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human tumor specific growth factor / tumor associated factor (TSGF) ELISA Kit 人特異生長因子/相關因子(TSGF)ELISA試劑盒
Humannuclearfactor-κBp65,NF-κBp65ELISAKit 人核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κBp65)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humaninhibitorofapoptosis,IAPELISA試劑盒人細胞凋亡抑制因子(IAP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織基質金屬蛋白酶(MMP-8)活性熒光定量檢測試劑盒20次
HumanLegionellapneumophilaantigen,LPAgELISAKit人軍團菌抗原(LPAg)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
RIPA裂解液(2X)50ml使用說明書大鼠凋亡信號調節(jié)激酶I(ASK-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠凋亡相關因子配體(FASL)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠凋亡相關因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠第八因子相關抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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