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更新時間:2017-07-10 12:19:01瀏覽次數(shù):115次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)膜蛋白溶解液100ml免費代測實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
膜蛋白溶解液100ml免費代測注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
EGF Protein Human 重組人 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
大鼠腸動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
EDA2R Others Rat 大鼠 XEDAR / EDA2R 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
CCRF-CEM [CCRF CEM]人急性淋巴細(xì)胞白血病T淋巴細(xì)胞 The CCRF-CEM [CCRF CEM] human acute lymphoblastic leukemia T lymphocytes 1640+10%Hyclone 滅活血清
人虹膜色素上皮細(xì)胞HIPEpiC
293ET(人胚腎細(xì)胞(SV40T和EBNA1基因修飾細(xì)胞)) 5×106cells/瓶×2 原代心肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/250/100ml
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-A5
CRIP2 Others Human 人 CRIP2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
原代系膜細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml
mCF, 小鼠心臟成纖維細(xì)胞 小鼠雜交瘤細(xì)胞,7F2細(xì)胞 EL4. IL-2(淋巴瘤細(xì)胞)
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HCT-8 [HRT-18]
FGFRL1 Others Mouse 小鼠 FGFRL1 / FGFR5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
NA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 神經(jīng)氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人羊膜細(xì)胞;HA
CL-0311293E(人胚腎細(xì)胞(EBNA1基因修飾))5×106cells/瓶×2
SHZ-88細(xì)胞,癌細(xì)胞 人肥大細(xì)胞白血病細(xì)胞,CHMAS細(xì)胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY1036
22RV1(人前列腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
PVR Others Mouse 小鼠 CD155 / PVR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠可溶性凋亡相關(guān)因子(sFAS/Apo-1)ELISA試劑盒 ,英文名: sFAS/Apo-1 ELISA Kit
人神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA檢測試劑盒HumanNeurotrophin4,NT-4ELISAKIT 96T/48T
核黃素轉(zhuǎn)運因子1(RFT1)免疫試劑盒 Human riboflavin transporter 1,RFT1 ELISA Kit
CLIAKitforomentinELISAKit大鼠網(wǎng)膜素規(guī)格:48T/96T
特定成熟微型RNA(miRNA)2位修飾抑制劑合成2U
ELISAKitβ-TG人β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白規(guī)格:48T/96T
人載脂蛋白H(Apo-H)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand 4 (TRAIL-R4) ELISA Kit 人壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)ELISA試劑盒
HumanCalfintestinalalkalinephosphatase,CIAPELISAKit 人牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
humaninhibinbeta-B,InhbbELISA試劑盒人抑制素β-B(Inhbb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-7)活性比色法定量檢測試劑盒20次
HumanLeptinreceptor,LR/Ob-RELISAKit人苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
膜蛋白溶解液100ml免費代測大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠肥大細(xì)胞類*(MCT)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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