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更新時間:2017-07-10 12:18:45瀏覽次數(shù):171次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)總蛋白提取試劑盒(無去垢劑)100T實(shí)驗(yàn)方法
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膜蛋白溶解液50ml使用說明書實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
膜蛋白溶解液50ml使用說明書注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
BTC Protein Mouse 重組小鼠 BTC / Betacellulin 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
大鼠腸粘膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
ALCAM Others Rat 大鼠 ALCAM / CD166 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
A-375人惡性黑色素瘤細(xì)胞 A-375 human malignant melanoma cells DMEM+10% FBS
人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HVT
293E(人胚腎細(xì)胞(EBNA1基因修飾)) 5×106cells/瓶×2 原代神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/250/100ml
人心臟成纖維細(xì)胞總RNAHCF tRNA
CROT Others Human 人 CROT (474 Leu/Val) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
敘利亞倉鼠肌肉細(xì)胞;GH-M1
SMMC-7721細(xì)胞,肝癌細(xì)胞 人羊膜細(xì)胞系,Wish細(xì)胞 倉鼠/小鼠雜交瘤細(xì)胞;145-2C11
雜交瘤(B類);Z51B3C10H12A12G2F7E7
HAVCR1 Others Human 人 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
SELP Others Mouse 小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人羊膜上皮細(xì)胞RNAHAmEpiC miRNA5 μg
SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-1
CL187/CCL187細(xì)胞,人大腸癌細(xì)胞 人黑色素瘤細(xì)胞,M14細(xì)胞 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞;RPMI-8226 [RPMI8826]
Hela(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
ACVRL1 Others Mouse 小鼠 ALK-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
小鼠表睪酮(ET)ELISA試劑盒 ,英文名: ET ELISA Kit
人神經(jīng)元凋亡抑制蛋白(NAIP)ELISA檢測試劑盒Humanneuronalapoptosisinhibitoryprotein,NAIPELISAKit 96T/48T
大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)免疫試劑盒 Rat soluble Cluster of differentiation 86,sCD86 ELISA Kit
英文名稱RatGRHELISAKit大鼠促生長激素釋放激素(GRH)規(guī)格:96T/48T
組分氧化應(yīng)激活性氧(ROS)魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒50次
ELISAKitNAIP人神經(jīng)元凋亡抑制蛋白規(guī)格:48T/96T
人再生基因蛋白IV(REG-4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand 4 (TRAIL-R4) ELISA Kit 大鼠壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)ELISA試劑盒
Humannitricoxide,NOELISAKit 人血清一氧化氮(NO)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumaninhibinB,INH-BELISA試劑盒人抑制素B(INH-B)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-3)活性熒光定量檢測試劑盒20次
HumanLeptinSolubleReceptor,sLRELISAKit人可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
膜蛋白溶解液50ml使用說明書大鼠鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶2(CAMK2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠復(fù)合前列腺特異性抗原(CPSA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠附睪蛋白4(HE-4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠脯酸羥化酶(PHD)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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