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乳清蛋白提取試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法

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更新時(shí)間:2017-07-10 11:50:51瀏覽次數(shù):270次

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乳清蛋白提取試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類(lèi)推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
乳清蛋白提取試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過(guò)皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
7PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
表皮生長(zhǎng)因子

大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

TNFSF9 Others Rat 大鼠 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

A9細(xì)胞,小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞 HCC1428(人癌細(xì)胞) 非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-C;Vero-HCV-C

星形細(xì)胞生長(zhǎng)添加物SteCGS

Ishikawa(人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 滑膜細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
腦膜細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

CSNK2A1 Others Human CSNK2A1 / CK2A1 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞;RAW 264.7 [RAW264.7

CHO/dhFr-細(xì)胞,中國(guó)倉(cāng)鼠二氫*還原酶缺陷細(xì)胞 人肝癌細(xì)胞,HuH-7細(xì)胞 CL-0144LoVo(人大腸癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞;V79

AXL Others Mouse 小鼠 Axl Kinase 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
IL1RL1 Others Human IL1RL1 / ST2 ( isoform A ) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人心臟成纖維細(xì)胞cDNAHCF cDNA

4179 長(zhǎng)尾綠猴胚胎細(xì)胞

CL-0271D283 Med(人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

rCSC, 大鼠心肌細(xì)胞

APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株(HEK293);APP-PS1 人支持細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
大鼠末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人生長(zhǎng)激素(GH)免疫試劑盒 Human growth hormone,HGH ELISA KIT

MouseGastrointestinalcancerMarker-CA199ELISAKit小鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

SheepInterleukin2,IL-2ELISA試劑盒綿羊白介素2(IL-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

Humanmastcelltryptase,MCISA試劑盒人肥大細(xì)胞類(lèi)*(MCT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

humanphosphofructokinase-plaet,PFKPELISAKit人血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human lipoprotein lipase (LPL) ELISA Kit 人脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒

HumanHistoneDeacetylase,HDELISAKit 人組織蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanHyaluronidase,HAaseELISA試劑盒人透明質(zhì)酸酶(HAase)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組織肌酐(CREATININE)酶連續(xù)反應(yīng)比色法定量檢測(cè)試劑盒20

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