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更新時(shí)間:2017-07-10 11:50:04瀏覽次數(shù):182次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 儀表網(wǎng)總蛋白提取試劑盒(無(wú)去垢劑)100T實(shí)驗(yàn)方法
細(xì)胞蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T使用說明書使用注意事項(xiàng)
1.微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測(cè)組織樣本。
細(xì)胞蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T使用說明書操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說,也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
(1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng),用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對(duì)照組;
(2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm,發(fā)射波長(zhǎng)647 nm,7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè),激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
細(xì)胞蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T使用說明書實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí),注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細(xì)胞;
(3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細(xì)胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
(5)Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
EFNA5 Protein Human 重組人 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
人角膜內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
IL17RA Others Rat 大鼠 IL17RA / IL17R 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
B95-8細(xì)胞,產(chǎn)EBV的絨猴白細(xì)胞 A549(人肺腺癌細(xì)胞) 非洲綠猴腎細(xì)胞;BS-C-1
*HBSS
HEL(人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21
CSNK2A2 Others Human 人 CSNK2A2 / CK2A2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
骨骼肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
人間充質(zhì)干細(xì)胞-肝 人肌肉成纖維細(xì)胞瘤,C2C12細(xì)胞 B16(黑色素瘤細(xì)胞)
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;NCI-H446
CD48 Others Mouse 小鼠 CD48 / BCM1 / SLAMF2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
IL12B Others Marmoset 狨猴 IL12B / IL-12B 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
人心肌細(xì)胞-心室cDNAHCF-av cDNA
大鼠腎小球系膜細(xì)胞;HBZY-1
HepG-2細(xì)胞,人肝癌細(xì)胞 上頜牙齦癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌,GNM細(xì)胞 大鼠胚胎心肌細(xì)胞;H9c2(2-1)
Jurkat, Clone E6-1 (人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
Promocell C-25110 Hepatocyte Growth MediumKIT, 肝細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基套裝 500ml
小鼠20S-蛋白酶體(20S-PSM)ELISA試劑盒 ,英文名: 20S-PSM ELISA Kit
人生長(zhǎng)激素釋放多肽(GHRP)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanGrowthHormoneReleasingPeptide,GHRPELISAKit 96T/48T
大鼠抵抗素(Resistin)免疫試劑盒 Rat Resistin ELISA Kit
CLIAKitforTSGF(MouseTumorSpecificGrowthFacter/tumorsuppliedgroupoffactor)ELISAKIT小鼠腫瘤特異生長(zhǎng)因子/腫瘤相關(guān)因子規(guī)格:48T/96T
胚胎干細(xì)胞神經(jīng)細(xì)胞(neuron)定向分化試劑盒5次
ELISAKitGzms-A人顆粒酶A規(guī)格:48T/96T
人中性粒細(xì)胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human fat Arabia mannan (LAM) ELISA Kit 人脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)ELISA試劑盒
Humanalpha-L-fucosidase,AFUELISAKit 人αL巖藻糖苷酶(AFU)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanhumanlysosomal-associatedmembraneprotein2,HLAMP-2ELISA試劑盒人溶酶體相關(guān)膜蛋白2(HLAMP-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織活化*10(FACTORXa)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
Humanliverkidneymicrosomeautoantibody,LKMELISAKit人抗肝腎微粒體抗體(LKM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
細(xì)胞蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T使用說明書大鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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