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更新時間:2017-07-10 11:49:12瀏覽次數(shù):454次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網組織蛋白快速提取試劑盒(離心柱法)100T免費代測實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
組織蛋白快速提取試劑盒(離心柱法)100T免費代測注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
EFNB1 Protein Human 重組人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His 標簽)
人角膜成纖維細胞*培養(yǎng)基 100mL
BCAM Others Rat 大鼠 BCAM 人細胞裂解液 (陽性對照)
CT-26.WT細胞,小鼠大腸癌細胞 CBRH-7919(大鼠肝癌細胞) 大額牛皮膚成纖維樣細胞;BOS-2
一氧化氮色標法檢測試劑盒NO
H-97(人高轉移肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 肺微血管內皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
小鼠黑質神經元MN-sn
CST3 Others Rat 大鼠 CST3 / Cystatin-C / Cystatin-3 人細胞裂解液 (陽性對照)
HEL1 人胚肺成纖維樣細胞(男)
CM-R075大鼠主動脈內皮細胞*培養(yǎng)基100mL
MGC80-3(MGC-803)人胃癌細胞
EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0923 人腦動脈血管內皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)(5×105)
人心肌細胞-cDNAHCM-a cDNA
大鼠骨髓瘤細胞;IR983F
雜交瘤(B類);Z153A2A5B3A12 小鼠牙細胞*培養(yǎng)基 100mL
LX-2, 人肝星形細胞株 Human
CTLA4 Others Mouse 小鼠 CTLA4 / CD152 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠內皮素(ET)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)免疫試劑盒 Human growth hormone releasing peptide-Ghrelin,GHRP-Ghrelin ELISA Kit
MouseFreeThyroxine,FT4ELISAKit小鼠游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
SheepComplementfragment3brccptor,C3bRELISA試劑盒綿羊補體片段3b受體(C3bR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanMannmabindingprotein/mannanbindinglectin,MBP/MBLELISA試劑盒人甘露糖結合蛋白/甘露糖結合凝集素(MBP/MBL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanphosphoProteinKinaseC,P-PKCELISAKit人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人壞死因子α轉化酶(TACE)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human integrin alpha v beta 3 (Integrin alpha v beta 3) ELISA Kit 人整合素αⅤβ3(Integrin αⅤβ3)ELISA試劑盒
HumanHeatShockProtein40,HSP-40ELISAKit 人熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanHomocysteicacid,HcyELISA試劑盒人同型半*(Hcy)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-2)活性熒光定量檢測試劑盒20次
HumanLongactingthyroidstimulator,LATSELISAKit人*甲狀腺刺激素(LATS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織蛋白快速提取試劑盒(離心柱法)100T免費代測大鼠可溶性白細胞分化抗原14(sCD14)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠可溶性Toll樣受體6(sTLR6)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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