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更新時間:2017-07-10 11:48:58瀏覽次數(shù):176次
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細胞蛋白快速提取試劑盒(離心柱法)50T使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
細胞蛋白快速提取試劑盒(離心柱法)50T使用說明書注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
EFNA1 Protein Human 重組人 Ephrin-A1 / EFNA1 蛋白 (His 標簽)
人視網(wǎng)膜微血管內皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
F11R Others Rat 大鼠 JAM-A / F11R 人細胞裂解液 (陽性對照)
FAT細胞,大鼠鼻咽癌細胞 SHZ-88(大鼠癌細胞) 大額牛肺細胞;BFR-L1
膠原I-3D凝膠試劑盒C3DGK
EJ(人膀胱癌細胞) 5×106cells/瓶×2 肺大靜脈平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
CM-M031小鼠腸動脈內皮細胞*培養(yǎng)基100mL
CST6 Others Mouse 小鼠 Cystatin E / CST6 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠前列腺上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]小鼠腦神經(jīng)瘤細胞 Neuro-2a [N2a; Neuro-2a] mouse neuroblastoma Neuro-2a cells MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS
IL27 Protein Mouse 重組小鼠 IL27 / Interleukin-27 蛋白 (His 標簽)
TM4(正常小鼠Sertoli細胞) 5×106cells/瓶×2 SK-HEP-1(人肝癌細胞)
A2M Others Human 人 A2M / CPAMD5 / Alpha-2-macroglobulin 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人心肌細胞HCM
SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-7
HFL-I細胞,胚肺成纖維細胞 人小腸癌細胞系,HIC細胞 CM-R061大鼠腎動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL
大鼠肝癌細胞;CBRH-7919 [CBRH7919]
TEK Others Human 人 Tie2 / CD202b / TEK 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠羥脯酸(Hyp)ELISA試劑盒 ,英文名: Hyp ELISA Kit
人生長激素釋放因子(GH-RF)ELISA檢測試劑盒Humangrowthhormonerelasingfactor,GH-RFELISAKit 96T/48T
魚胰島素樣生長因子1受體(IGF-1R)免疫試劑盒 Fish Insulin-like Growth Factors 1 Receptor,IGF-1R ELISA Kit
CLIAKitforPGF2AlphaELISAKit大鼠前列腺素F2α規(guī)格:48T/96T
食物甘素(dulcin)含量薄層色譜法定性檢測試劑盒20次
ELISAKitHSV-Ag2人單純皰疹病毒抗原2規(guī)格:48T/96T
人壞死因子α轉化酶(TACE/ADAM17)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human true insulin (TI) ELISA Kit 人真胰島素(TI)ELISA試劑盒
HumanHeatShockProtein20,HSP-20ELISAKit 人熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humanhiston-H2bELISA試劑盒人組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-2)活性比色法定量檢測試劑盒20次
Humanlowdensitylipoprotein,LDLELISAKit人低密度脂蛋白(LDL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
細胞蛋白快速提取試劑盒(離心柱法)50T使用說明書大鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠可溶性白細胞分化抗原86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠可溶性白細胞分化抗原40配體(sCD40L)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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