固定細(xì)胞蛋白提取試劑盒50T免費代測使用注意事項
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測時，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
固定細(xì)胞蛋白提取試劑盒50T免費代測操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請在1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
固定細(xì)胞蛋白提取試劑盒50T免費代測實驗步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
EFNA3 Protein Human 重組人 Ephrin-A3 / EFNA3 / EFL2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

人晶狀體上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

EPCAM Others Rat 大鼠 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

NRK-52E細(xì)胞，大鼠腎細(xì)胞 HEL(紅白血病細(xì)胞) 豬腎細(xì)胞;PK-15

人小腦顆粒細(xì)胞裂解物HCGCL

D283 Med(人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 腸粘膜上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)
人臍動脈內(nèi)皮細(xì)胞

CTF1 Others Human 人 Cardiotrophin-1 / CTF1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人心肌細(xì)胞RNAHCM miRNA5 μg

兔角膜后基質(zhì)層成纖維細(xì)胞;RCBBF 肺癌細(xì)胞，A549[A-549]細(xì)胞 145-2C11細(xì)胞，倉鼠/小鼠雜交瘤細(xì)胞

人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞;HK-2

HA Others H10N3 甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
PTGFRN Others Cynomolgus 食蟹猴 EWI-F / PTGFRN 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;NCI-H209

CL-0449SW 780(人膀胱移行細(xì)胞癌)5×106cells/瓶×2

2BS細(xì)胞，胚肺細(xì)胞 人前列腺癌細(xì)胞,VLcop細(xì)胞 人腎小管上皮細(xì)胞;HKC

獼猴皮膚細(xì)胞;MMS7

TNFRSF21 Others Human 人 DR6 / TNFRSF21 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

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