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更新時間:2017-07-10 10:05:57瀏覽次數(shù):149次
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蛋白離心柱個使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
IL8 Protein Human 重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 1-77, Fc 標簽)
人心房肌細胞*培養(yǎng)基 100mL
CD27 Others Human 人 CD27 / TNFRSF7 人細胞裂解液 (陽性對照)
PC-12細胞,大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化) HCT 116(結腸癌細胞) 人神經母細胞瘤細胞;BE(2)-M17
人前脂肪細胞-皮下RNAHPA-s miRNA5 μg
ST(豬細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 EphA3 (aa 569-984) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
CM-R017大鼠胰腺導管上皮細胞*培養(yǎng)基100mL
DPEP1 Others Human 人 Dehydropeptidase-I / DPEP1 人細胞裂解液 (陽性對照)
人結膜成纖維細胞HConF
ALVA細胞,人前列腺癌細胞 大鼠氣管上皮細胞,RTE細胞 大鼠腦膜細胞RMC
J774A.1(小鼠單核巨噬細胞) 5×106cells/瓶×2
A-375(人惡性黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H123人神經小膠質細胞*培養(yǎng)基100mL 人胚肺二倍體細胞;KMB-17
IL17RB Others Human 人 IL17RB / IL-17 Receptor B 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人生發(fā)基質細胞裂解物HHGMCL
人低分化肺腺癌細胞;SK-LU-1
HO-8910細胞,卵巢癌細胞 人胃腺癌細胞,MCG803細胞 大耳山羊肺細胞;LDG-1
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);P19-CAG-tTA-3C8
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/14/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠*受體(TR)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人瞬態(tài)電壓感受器陽離子通道,子類V,成員4(TrpV4)免疫試劑盒 Human TrpV4 ELISA Kit
Mouseeosinophilchemotacticfactor,ECFELISAKit小鼠嗜酸粒細胞趨化因子(ECF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Ratverylateappearingantigen,VLAELISA試劑盒大鼠遲現(xiàn)抗原(VLA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanlymphotactin,Lptn/LTNELISA試劑盒人淋巴細胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanParathyroidHormoneRelatedProtein,PTHrPELISAKit人甲狀旁腺激素相關蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat apolipoprotein B100 (apo-B100) ELISA Kit 大鼠載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒
Humananti-hepatitisDvirusantibody,anti-HDVELISAKit 人抗丁型肝炎病毒抗體(anti-HDV)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanHeatShockProtein60,HSP-60ELISA試劑盒人熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織副傷*A(SalmonellaParatyphiA)定量PCR擴增檢測試劑盒20次
HumanMatrixmetalloproteinase3,MMP-3ELISAKit人基質金屬蛋白酶3(MMP-3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
大鼠血小板生成素(TPO)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠血小板反應蛋白/*敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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