膜蛋白純化試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
膜蛋白純化試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
膜蛋白純化試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
IL8 Protein Human 重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 6-77, Fc 標(biāo)簽)

人尿道上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

CD3D Others Mouse 小鼠 CD3d / CD3 delta 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

Neuro-2a細(xì)胞，小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞 MDA-MB-231(癌細(xì)胞) 人腦瘤細(xì)胞;SF767

人羊膜細(xì)胞;WISH

SP2/0(小鼠骨髓瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 ANTXR2 / CMG2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
CM-M020小鼠上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

DPEP2 Others Human 人 DPEP2 / MBD-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)基PAM

HCC 94細(xì)胞，人子宮鱗癌細(xì)胞(高分化) 小鼠骨髓瘤細(xì)胞,Fox-NY細(xì)胞 人雪旺細(xì)胞HSC

hFOB 1.19(SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

hMo-PB single 人類外周血單核細(xì)胞團(tuán)塊單一來源，超純 > 1 mio.cells 人小腦顆粒細(xì)胞RNAHCGC miRNA5 μg
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/New York/18/2009) HA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

人腎臟上皮細(xì)胞HREpiC

IEC-6 大鼠小腸引窩上皮細(xì)胞

CM-H115人腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

U266B1 [U266], 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞

人細(xì)胞;Hela 人晶狀體上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
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漆酶試劑盒 可見分光光度法 50管/24樣

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