當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>蛋白提取/檢測>> Tris-Tricine陰極緩沖液(5×)500ml使用說明書
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更新時間:2017-07-10 10:04:54瀏覽次數(shù):248次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)總蛋白提取試劑盒(無去垢劑)100T實(shí)驗(yàn)方法
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Tris-Tricine陰極緩沖液(5×)500ml使用說明書實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
Tris-Tricine陰極緩沖液(5×)500ml使用說明書注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
CCL5 Protein Human 重組人 CCL5 / RANTES 蛋白 (His & mucin 標(biāo)簽)
人腎成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
FCRL1 Others Mouse 小鼠 FCRL1 / FCRH1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
P19細(xì)胞,小鼠畸胎瘤細(xì)胞 MCF7(癌細(xì)胞) 人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;A-204
人胚肺成纖維細(xì)胞;WI-38 [WI38]
SK-OV-3(人卵巢癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 Alpha 1 Antitrypsin / SerpinA1a 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
CL-0040BT-474(人導(dǎo)管癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
DPP4 Others Cynomolgus 食蟹猴 DPP4 / DPPIV / CD26 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
*/*溶液P/S
Hep 3B2.1-7[Hep 3B;Hep-3B;Hep3B]細(xì)胞,人肝癌細(xì)胞 人胚腎細(xì)胞(亞系克隆),FIP293細(xì)胞 胎兒表皮角化細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
大耳山羊皮膚細(xì)胞;LDG-3
SERPIND1 Others Human 人 SerpinD1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
HA Others H10N9 甲型流感 H10N9 (A/duck/HongKong/562/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人腎小球內(nèi)皮細(xì)胞HRGEC
大鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
Raji人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞 Raji human Burkitt's lymphoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS
FGF12 Protein Canine 重組狗 FGF12 蛋白
AML-193(人急性單核細(xì)胞白血病單核細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人神經(jīng)細(xì)胞HN
大鼠*Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人*/*蛋白磷酸酶(STK)免疫試劑盒 Human serine/threonine protein kinase,STK ELISA Kit
FDA水解酶試劑盒 可見分光光度法 50管/24樣
RatVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor1,VEGFR-1/Flt1ELISA試劑盒大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanlymphocytefactorELISA試劑盒人淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanparamyxovirusparotitisIgMELISAKit人腮腺炎病毒IgMELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
山羊白介素2受體(IL-2R)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human pancreatic lipase (PL) ELISA Kit 人胰脂肪酶(PL)ELISA試劑盒
HumanGlutamatedehydrogenase;GDHELISAKit 人*脫輕酶(GDH)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanHeatShockFactor1,HSF1ELISA試劑盒人熱休克因子1(HSF-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織脯氨酰肽酶(prolinase)比色法定量檢測試劑盒20次
HumanMatrixmetalloproteinase8/Neutrophilcollagenase,MMP-8ELISAKit人基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶(MMP-8)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Tris-Tricine陰極緩沖液(5×)500ml使用說明書大鼠胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠胰島素受體β(ISR-β)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠胰島素(INS)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠*原激活肽(TAP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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