PAGE不連續(xù)凝膠電泳緩沖液(5×)100ml實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
PAGE不連續(xù)凝膠電泳緩沖液(5×)100ml實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō)，也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
PAGE不連續(xù)凝膠電泳緩沖液(5×)100ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
CCL8 Protein Human 重組人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 標(biāo)簽)

人膀胱平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

IL1R2 Others Mouse 小鼠 IL1R2 / CD121b 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

Hepa 1-6細(xì)胞，小鼠肝癌細(xì)胞 PC-12(腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞) EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0923

人胚肺成纖維細(xì)胞;MRC-5

SK-Hep-1(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 狗 IL17RD 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
CM-H135人脈絡(luò)膜微血管細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

DPYS Others Human 人 DPYS / Dihydropyrimidinase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人脾臟內(nèi)皮細(xì)胞HSEC

非洲綠猴腎細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);COS-1 [COS1] 轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細(xì)胞，293細(xì)胞 QGY-7703(肝癌細(xì)胞)

人肺癌細(xì)胞;A549 [A-549]

FAS Others Mouse 小鼠 FAS / TNFRSF6 / CD95 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
CD8A Others Ferret 雪貂 CD8A / CD8 alpha chain 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人腎系膜細(xì)胞總RNAHRMC tRNA

NCI-H520 人肺鱗癌細(xì)胞

CL-0361HPAC(人胰腺腺泡上皮癌)5×106cells/瓶×2

mEPC, 小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓

人胚腎二倍體細(xì)胞;HEK-2 人直腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
大鼠*ⅩⅢ(FⅩⅢ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人*蛋白酶HTRA1(HTRA1)免疫試劑盒 Human Serine protease HTRA1,HTRA1 ELISA kit

單寧含量試劑盒 可見分光光度法 50管/48樣

RatVascularEndothelialcellGrowthFactorD,VEGF-DELISA試劑盒大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子D(VEGF-D)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanLymeIgGELISA試劑盒人萊姆IgG(Lyme-IgG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Humanpara-aminobenzoicacid,PABAELISAKit人對(duì)氨基苯甲酸(PABA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
山羊雌二醇(E2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat inducible nitric oxide synthase (iNOS) ELISA Kit 大鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA試劑盒

Humananti-cytomegalovirusIgGantibody,anti-CMVIgGELISAKit 人抗巨細(xì)胞病毒抗體IgG(anti-CMVIgG)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

humanguanylatenucleotidebindingprotein4,Gbp4ELISA試劑盒人鳥苷酸結(jié)合蛋白4(Gbp4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織*羥化酶(prolilhydroxylase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Humanmaturationpromotingfactor,MPFELISAKit人成熟促進(jìn)因子(MPF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
PAGE不連續(xù)凝膠電泳緩沖液(5×)100ml實(shí)驗(yàn)方法大鼠乙醛脫氫酶(ALDH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠乙醇脫氫酶(ADH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠胰高血糖素樣肽1(Glp-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠胰高血糖素（Glu）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝