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更新時間:2017-07-10 10:01:34瀏覽次數(shù):98次
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5×非變性蛋白上樣緩沖液10ml免費代測實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
5×非變性蛋白上樣緩沖液10ml免費代測注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
CCL17 Protein Human 重組人 CCL17 / TARC / SCYA17 蛋白
人腎上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
IL10RB Others Rat 大鼠 IL10RB / IL10R2 人細胞裂解液 (陽性對照)
B16F10細胞,小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)移細胞 FRhK-4(恒河猴胚腎細胞) SV40轉(zhuǎn)染人成骨細胞;hFOB 1.19
人胚肺成纖維細胞;MRC-5
SHG-44 (人膠質(zhì)瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 人細胞裂解液 (陽性對照)
CM-R111大鼠雪旺氏細胞*培養(yǎng)基100mL
ECD Others Human 人 ECD / Ecdysoneless homolog 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
豬角膜上皮細胞PCEpiC
非洲綠猴腎細胞;BS-C-1 人單核細胞,THP-1細胞 Caco-2(結(jié)腸腺癌細胞)
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0919
EFNB2 Others Mouse 小鼠 EFNB2 / EphrinB2 人細胞裂解液 (陽性對照)
人表皮角質(zhì)細胞-新生兒(HEK-n)( 5×105 )
人腎透明細胞癌;Caki-1
RGC-5, 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞
人十二脂腸腺癌;HuTu-80 大鼠前列腺上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
NFS-60 小鼠白血病細胞G-CSF依賴性
ECE1 Others Human 人 ECE1 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)免疫試劑盒 Human mitogen-activated protein kinase kinase 6,MAP2K6 ELISA kit
二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)試劑盒 紫外分光光度法 50管/48樣
Raturokinaseplasminogenactivator,uPAELISA試劑盒大鼠*型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
humanlungcancerMarkerELISA試劑盒人肺癌標志物ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanPancreaticPolypeptide,PPELISAKit人胰多肽(PP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
山羊骨形成蛋白2(BMP-2)ELISA試劑盒 組裝/原裝
Rat free three iodothyronine (Free-T3) ELISA Kit 大鼠游離三碘甲狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA試劑盒
HumanCytochrome-C,Cyt-CELISAKit 人細胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humangrowth-regulatedoncogeneβ/melanomagrowthstimulatingactivity,GROβ/MGSAELISA試劑盒人生長調(diào)節(jié)致癌基因β/黑素瘤生激因子(GROβ/CXCL2/MGSA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織二胺氧化酶(DAO)活性熒光定量檢測試劑盒20次
HumanMelanomaMarkerA,MART/Melan-AELISAKit人黑色素瘤標記物(MART/Melan-A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
5×非變性蛋白上樣緩沖液10ml免費代測大鼠再生基因蛋白IV(REG-4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠載脂蛋白H(Apo-H)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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