當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>蛋白提取/檢測>> 考馬斯亮藍(lán)染色液500ml免費(fèi)代測
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聯(lián)系我時(shí),請告知來自 儀表網(wǎng)總蛋白提取試劑盒(無去垢劑)100T實(shí)驗(yàn)方法
考馬斯亮藍(lán)染色液500ml免費(fèi)代測注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個(gè)操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
考馬斯亮藍(lán)染色液500ml免費(fèi)代測實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
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XCL1 Protein Mouse 重組小鼠 XCL1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
人胃粘膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
TNFRSF1B Others Cynomolgus 食蟹猴 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
MFC細(xì)胞,小鼠胃癌細(xì)胞 BHK(幼倉鼠腎細(xì)胞) 獼猴肺細(xì)胞;MML2
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;NCI-H446
RBE(人膽管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 IFNA5 / IFNaG 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
CL-0411PA-1(人卵巢腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
EFNA5 Others Cynomolgus 食蟹猴 Ephrin-A5 / EFNA5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠牙細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
PIEC豬髖動脈內(nèi)皮細(xì)胞 PIEC pig iliac artery endothelial cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS
IL36G Protein Human 重組人 IL36G / IL1F9 蛋白 (aa 18-169, His 標(biāo)簽)
NCTC 1469(小鼠正常肝細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 HCT 116(結(jié)腸癌細(xì)胞)
FCER1A Others Human 人 FcERI / FCER1A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人神經(jīng)元RNAHN miRNA5 μg
人冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
3T3NIH細(xì)胞,小鼠成纖維細(xì)胞 HUVEC(人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞) 小鼠垂體瘤細(xì)胞;GT1-1
CSF1 Protein Mouse 重組小鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
Tca-8113(人舌鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 野生型人c-kit受體細(xì)胞株;A7d
大鼠前列腺酸性磷酸酶(PAP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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