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Tween20/TBS溶液(10×TBST,pH7.4)500ml實驗方法

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更新時間:2017-07-10 09:45:32瀏覽次數(shù):178次

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Tween20/TBS溶液(10×TBST,pH7.4)500ml實驗方法使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
27-AAD避光保存及使用。
37-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
Tween20/TBS溶液(10×TBST,pH7.4)500ml實驗方法操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)515min;
3.加入500μL1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內(nèi),進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導(dǎo)細胞凋亡;
1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
2)用PBS洗滌細胞兩次;
3)在500μL 1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
Tween20/TBS溶液(10×TBST,pH7.4)500ml實驗方法實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTACa2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer
2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心510分鐘,收集細胞;
3)細胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS4)重懸細胞一次,2000rpm離心510分鐘,洗滌細胞;
4)加入300μL 1×Binding Buffer 懸浮細胞;
5Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μLAnnexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
6PI標(biāo)記:上機前5分鐘再加入5μLPI染色。
7)上機前,補加200μL1×Binding Buffer。
CXCL12 Protein Human 重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (isoform a)

人結(jié)腸平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL

GGT1 Others Rat 大鼠 GGT1 人細胞裂解液 (陽性對照)

M1細胞,小鼠白血病細胞 脆弱擬桿菌 新生牛眼Tenon's囊成纖維細胞;NBTF

小鼠胚胎成纖維細胞(來自NIH3T3);PA12

P388D1(小鼠淋巴樣瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 野豬 (Pig) Legumain / LGMN / AEP 人細胞裂解液 (陽性對照)
原代神經(jīng)膠質(zhì)細胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/100ml

EFNB2 Others Rat 大鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 人細胞裂解液 (陽性對照)

大鼠皮下脂肪細胞*培養(yǎng)基 100mL

FRhK-4恒河猴胚腎細胞 FRhK-4 Ganges RIver monkey embryo kidney cell DMEM培養(yǎng)基+10%FBS

IFNA1 Protein Rat 重組大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

MCF 7B(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 BHK(幼倉鼠腎細胞)
20. 細胞系統(tǒng)

人神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤細胞;U251

CM-H128人角膜上皮細胞*培養(yǎng)基100mL

小鼠子細胞;U14 小鼠肝竇內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基 100mL

NSC,大鼠神經(jīng)干細胞 Rattus

F2 Others Mouse 小鼠 FII / F2 / Thrombin 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠Discs大同源物4(DLG4)ELISA試劑盒 ,英文名: DLG4 ELISA Kit

人髓系細胞觸發(fā)受體-1(TREM-1)ELISA檢測試劑盒HumanTriggeringReceptorExpressesonMyeloidCells-1,TREM-1ELISAKit 96T/48T

大鼠高密度脂蛋白2(HDL2)免疫試劑盒 Rat high density lipoprotein 2,HDL2 ELISA Kit

CLIAKitforVEGF-BELISAKit大鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子B規(guī)格:48T/96T

免疫印跡AP-BCIP/NBT底物顯色試劑盒10

ELISAKitSCCAg-2人鱗狀上皮細胞癌抗原2規(guī)格:48T/96T
兔交聯(lián)物(PY)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human insulin (INS) ELISA Kit 人胰島素(INS)ELISA試劑盒

Humanbacterialvaginosis,BVELISAKit 人細菌(BV)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISA試劑盒人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組織蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒20

Humanmonocytechemotacticprotein3,MCP-3ELISAKit人單核細胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Tween20/TBS溶液(10×TBST,pH7.4)500ml實驗方法雞α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

N-乙酰-β-D-基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

L苯丙酸解酶(PAL)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

FMS樣酪酸激酶3(Flt3)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

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