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更新時間:2017-07-10 09:43:56瀏覽次數(shù):98次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)Tris緩沖鹽溶液(20×TBS,pH7.4)500ml售后服務(wù)實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
Tris緩沖鹽溶液(20×TBS,pH7.4)500ml售后服務(wù)注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
CXCL10 Protein Human 重組人 CXCL10 / Crg-2 蛋白
人腸動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
ORM2 Others Human 人 ORM2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
APP-PS1細(xì)胞,人APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株(HEK293) 宋內(nèi)氏志賀氏菌(Sh.sonnei) 山羊腎上皮樣細(xì)胞;DG-K1
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;BALB/C 3T3
OS-RC-2(人腎癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人癌細(xì)胞;SK-BR-3
EFNB3 Others Rat 大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
F344大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 F344 rat bone marrow mesenchymal stem cells
U373細(xì)胞,人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系 福氏志賀氏菌(Shigella flexneri) 人無色素睫狀上皮細(xì)胞RNAHNPCEpiC miRNA5 μg
SK-N-BE(2) (人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
HEC-1-B(人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0418QGY-7703(人肝癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 散鱗鏡鯉尾鰭細(xì)胞;YZ21
PROM1 Others Rat 大鼠 CD133 / PROM1 / Prominin 1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞-懸浮生長RNAHOPC-os miRNA5 μg
兔角膜前基質(zhì)層成纖維細(xì)胞;RCFBF
HRT-S1細(xì)胞,人結(jié)腸癌細(xì)胞 人橫紋肌肉瘤細(xì)胞,TE671 subline No.2細(xì)胞 小鼠源細(xì)胞
HL-7702(人肝正常細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
BACE1 Others Human 人 BACE1 / ASP2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠醛脫氫酶(ALDH)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人髓樣分化因子88(MyD88)免疫試劑盒 Human MyD88 ELISA Kit
轉(zhuǎn)氫酶-1 紫外分光光度法 50管/48樣
RatTriggeringReceptorExpressesonMyeloidCells-1,TREM-1ELISA試劑盒大鼠髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(TREM-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanLipopolysaccharides,LPSELISA試劑盒人脂多糖/內(nèi)毒素(LPS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanorosomucoid,ORMELISAKit人類粘蛋白(ORM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔兒茶酚胺(CA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human trypsinogen activation peptide (TAP) ELISA Kit 人*原激活肽(TAP)ELISA試劑盒
Humanmorbillivirus,MVELISAKit 人麻疹病毒(MV)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanglutathione,GSHELISA試劑盒人*(GSH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織單胺氧化酶B型(MAO-B)活性熒光定量檢測試劑盒20次
Humanmorbillivirus,MVELISAKit人麻疹病毒(MV)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Tris緩沖鹽溶液(20×TBS,pH7.4)500ml售后服務(wù)雞白血病病毒抗原(ALV-AG)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
雞白痢抗體檢測(PD)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
雞白介素9(IL-9)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
雞白介素6(IL-6)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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