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ELISA包被緩沖液(10×)500ml實(shí)驗(yàn)方法

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更新時(shí)間:2017-07-10 09:38:40瀏覽次數(shù):252次

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ELISA包被緩沖液(10×)500ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類(lèi)推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線(xiàn)粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線(xiàn)粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
ELISA包被緩沖液(10×)500ml實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過(guò)皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
7PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
CCL1 Protein Human 重組人 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白

人臍帶單核細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

IL13 Others Mouse 小鼠 IL13 / ALRH 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

7WCY1.0細(xì)胞,人APP-PS1(C410Y)雙基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株 01群霍亂弧菌 豹貓肺成纖維樣細(xì)胞;LCL4

KM小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤瘤株;G422

NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 PRAP1 / Proline-rich acidic 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
CM-H095人骨骼肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

EGFL6 Others Human EGFL6 / EGF-L6 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞-HPMEC-a

非洲綠猴腎細(xì)胞系/IgRCD4-;VERO/IgRCD4- 畸胎瘤細(xì)胞,F9細(xì)胞 BEL-7404(肝癌細(xì)胞)

人癌細(xì)胞;MDA-MB-435S

TNFRSF21 Others Mouse 小鼠 DR6 / TNFRSF21 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
LCN2 Others Rat 大鼠 LCN2 / NGAL 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(懸浮生長(zhǎng))cDNAHOPC-os cDNA

KM小鼠網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤瘤株;L

TE-1細(xì)胞,食管癌細(xì)胞 人食管癌細(xì)胞,EC97076細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-C

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-C2

HA Others H2N2 甲型流感 H2N2 (A/Japan/305/1957) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
小鼠肝素(HS)ELISA試劑盒 ,英文名: HS ELISA Kit

人*(FK506)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanTacrolimus-FK506ELISAKit 96T/48T

大鼠一氧化氮合成酶(NOS)免疫試劑盒 Rat nitric oxide synthase,NOS ELISA Kit

英文名稱(chēng)TIMP-1金屬蛋白酶組織抑制因子-1規(guī)格:96T/48T

副傷*A(SalmonellaParatyphiA)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒2

ELISAKitMK人中期因子規(guī)格:48T/96T
兔*(cAMP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human chlamydial protease like activity factor (CPAF) ELISA Kit 人衣原體蛋白酶樣活性因子(CPAF)ELISA試劑盒

HumanCampylobacterJejuniPEB1ELISAKit 人空腸彎曲菌黏附蛋白(PEB1)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

humanglutamicaciddecarboxylaseautoantibody,GAD-AbELISA試劑盒人*脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組織單胺氧化酶A(MAO-A)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

HumanMucin-5subtypeAC,MUC5ACELISAKit人粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
ELISA包被緩沖液(10×)500ml實(shí)驗(yàn)方法雞肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

雞*(cAMP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

雞弓形蟲(chóng)循環(huán)抗原(TCAELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

雞鈣調(diào)磷酸酶(CaN)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

我司ELISA包被緩沖液(10×)500ml實(shí)驗(yàn)方法本著標(biāo)準(zhǔn)*、質(zhì)量*、服務(wù)*、信譽(yù)*的宗旨,為客戶(hù)提供輕松便捷,安全可靠的網(wǎng)上采購(gòu)模式!我們將竭誠(chéng)為您服務(wù),咨詢(xún)!

 

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