我司Western轉(zhuǎn)移緩沖液(5×),尼龍膜500ml實(shí)驗(yàn)方法本著標(biāo)準(zhǔn)*、質(zhì)量*、服務(wù)*、信譽(yù)*的宗旨，為客戶提供輕松便捷，安全可靠的網(wǎng)上采購模式！我們將竭誠為您服務(wù),咨詢！
Western轉(zhuǎn)移緩沖液(5×),尼龍膜500ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細(xì)胞懸液每50～100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞，CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞：
（1）取 10～60 萬細(xì)胞，重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
Western轉(zhuǎn)移緩沖液(5×),尼龍膜500ml實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
（1）本試劑只適用于實(shí)驗(yàn)，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時(shí)需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí)，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
（7）PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
CXCL12 Protein Canine 重組狗 CXCL12 / SDF-1 蛋白

人前列腺成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

IFNA5 Others Rat 大鼠 IFNA5 / IFNaG 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

Calu-6細(xì)胞，人退行性癌細(xì)胞 克雷伯肺炎桿菌 敘利亞倉鼠腎細(xì)胞;BHK-21

雜交瘤(B類);C3110D2E11

NCI-H1299(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H1N1 (A/USSR/90/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人支氣管上皮細(xì)胞總RNAHBEpiC tRNA

ELK1 Others Human 人 ELK1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-E1

QGY-7701細(xì)胞，肝癌細(xì)胞 人宮頸上皮細(xì)胞癌,Ski細(xì)胞 KM小鼠子瘤株;U27

小鼠結(jié)締組織L細(xì)胞株929克隆;L-929 [L929]

ULBP1 Others Human 人 ULBP1 / N2DL1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
CD40 Others Rat 大鼠 CD40 / TNFRSF5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人導(dǎo)管瘤細(xì)胞;UACC812

Wistar大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 Wistar rat bone marrow mesenchymal stem cells

SH-SY5Y細(xì)胞，人神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞 粘質(zhì)沙雷氏菌 人肝細(xì)胞RNAHH miRNA5 μg

SK-CO-1(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

HCT-8(人盲腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0402NCI-H520(人肺鱗癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 恒河猴腎細(xì)胞;MMK3
大鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

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