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轉(zhuǎn)膜液(Western),尼龍膜100ml使用說明書

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更新時間:2017-07-10 09:35:58瀏覽次數(shù):154次

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轉(zhuǎn)膜液(Western,尼龍膜100ml使用說明書使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
27-AAD避光保存及使用。
37-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
轉(zhuǎn)膜液(Western,尼龍膜100ml使用說明書操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)515min
3.加入500μL1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內(nèi),進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導(dǎo)細胞凋亡;
1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
2)用PBS洗滌細胞兩次;
3)在500μL 1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
轉(zhuǎn)膜液(Western,尼龍膜100ml使用說明書實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTACa2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer
2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心510分鐘,收集細胞;
3)細胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS4)重懸細胞一次,2000rpm離心510分鐘,洗滌細胞;
4)加入300μL 1×Binding Buffer 懸浮細胞;
5Annexin V-FITC標記:加入5μLAnnexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
6PI標記:上機前5分鐘再加入5μLPI染色。
7)上機前,補加200μL1×Binding Buffer。
CXCL16 Protein Canine 重組狗 CXCL16 / SR-PSOX 蛋白 (His 標簽)

人胰島β細胞*培養(yǎng)基 100mL

REG3A Others Rat 大鼠 REG3A 人細胞裂解液 (陽性對照)

GNM細胞,上頜牙齦癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌 宋氏志賀氏菌 APP-PS1(M146L)雙基因轉(zhuǎn)染CHO細胞株;7WML6.0

大鼠骨髓瘤細胞;IR983F

MSTO-211H(人肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H5N1 (A/chicken/VietNam/NCVD-016/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人肝細胞;HL-7702[L-02]

ENPEP Others Mouse 小鼠 ENPEP / Aminopeptidase A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

CL-0310VE(人血管內(nèi)皮細胞)5×106cells/瓶×2

RGC-5, 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞 人單核細胞型淋巴瘤,THP1細胞 GC-2spd(ts)(小鼠精母細胞)

綠色熒光蛋白標記人胃癌細胞;MGC803-GFP

EPCAM Others Human EpCAM / TROP1 人細胞裂解液 (陽性對照)
PDPN Others Mouse 小鼠 Podoplanin / PDPN 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

人導(dǎo)管瘤細胞;BT-474

CM-R022大鼠甲狀腺上皮細胞*培養(yǎng)基100mL

Raw264.7, 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞 牛腎細胞,MDBK細胞 Hs 578Bst(人成纖維細胞)

小鼠腎集合管細胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-1

SLAMF7 Others Mouse 小鼠 SLAMF7 / CRACC 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠Ⅳ型膠原(COL4)ELISA試劑盒 ,英文名: COL4 ELISA Kit

人胎盤堿性磷酸酶(PLAP)ELISA檢測試劑盒HumanPlacentalalkalinepkosphatase,PLAPELISAKit 96T/48T

大鼠肥大細胞類*免疫試劑盒 Rat Mast Cell Chymase ELISA Kit

CLIAKitforUlexEuropaeusagglutinin,UEAELISAKit荊豆凝集素規(guī)格:48T/96T

尿酶活性比色法定量檢測試劑盒20

ELISAKitENA人可提取核抗原規(guī)格:48T/96T
兔抗平滑肌抗體(ASMA) ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Circulating immune complexes (CIC) ELISA Kit 人循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)ELISA試劑盒

HumanechinococcusantibodyIgGELISAKit 人包蟲抗體IgGELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanglucokinaseregulatoryprotein,GKRPELISA試劑盒人葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白(GKRP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組織超氧化物陰離子熒光法定量檢測試劑盒20

Humanmuscarinicacetylcholinereceptor,M-AChRELISAKit人受體(M-AChR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
轉(zhuǎn)膜液(Western,尼龍膜100ml使用說明書雞孕激素/孕(PROGELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

雞乙酰乙酸檢測(ACAC)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

雞胰高血糖素(GC)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

雞胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

 

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