酵母膜蛋白/細(xì)胞質(zhì)蛋白提取試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
酵母膜蛋白/細(xì)胞質(zhì)蛋白提取試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō)，也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
酵母膜蛋白/細(xì)胞質(zhì)蛋白提取試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
CCL4 Protein Human 重組人 CCL4 / MIP1B 蛋白 (His 標(biāo)簽)

人上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

IL27 Others Mouse 小鼠 IL27 / Interleukin-27 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

TE671 subline No.2細(xì)胞，人橫紋肌肉瘤細(xì)胞 化膿性鏈球菌 轉(zhuǎn)PYTL基因小鼠支持細(xì)胞;15P-1

兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞;CCC-SMC-2

LS-174T(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 PRNP / Prion 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]

EPHA2 Others Human 人 EphA2 (aa 585-976) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

JEC, 人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞系

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細(xì)胞 小鼠胰腺癌beta細(xì)胞，Beta-TC-6細(xì)胞 EBTr (NBL-4)(牛胚氣管細(xì)胞)

人紅系白血病細(xì)胞;TF-1

HAVCR1 Others Canine 狗 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
PGA4 Others Human 人 PGA4 / Pepsinogen A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人癌細(xì)胞;MDA-MB-157

DU 145 人前列腺癌細(xì)胞

SW480 [SW-480]人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 SW480 [SW-480] human colon adenocarcinoma cells 1640+10% FBS

CD40LG Protein Rat 重組大鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

人羊膜上皮細(xì)胞(HAEpic)( 5×105 ) C2C12, 小鼠肌原細(xì)胞 Mouse
大鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人碳酸酐酶3(CA3)免疫試劑盒 Human Carbonic Anhydrase 3,CA3 ELISA Kit

土壤酸性磷酸酶(S-ACP)測(cè)試盒 可見(jiàn)分光光度法 50管/48樣

Ratthyrotropin-releasinghormone,TRHELISA試劑盒大鼠促甲狀腺素釋放激素(TRH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanleukocyteantigenA,HLA-AELISA試劑盒人類(lèi)白細(xì)胞抗原A(HLA-A)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

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組織半*蛋白酶-8(PASE-8)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20次

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