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更新時間:2017-07-10 09:26:03瀏覽次數(shù):128次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)酵母蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T免費代測使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測時,細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
酵母蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T免費代測操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請在1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對于貼壁細(xì)胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
(1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長,用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
酵母蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T免費代測實驗步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細(xì)胞;
(3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細(xì)胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
(5)Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標(biāo)記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。
CCL3 Protein Human 重組人 CCL3 / Mip1a 蛋白 (His 標(biāo)簽)
人呼吸道上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
IL7R Others Rat 大鼠 IL7R / IL7RA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
U2OS-Luc teT-on細(xì)胞,熒光素酶轉(zhuǎn)染人成骨肉瘤細(xì)胞 枯草芽孢桿菌 小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-1
大耳山羊肺細(xì)胞;LDG-1
LoVo(人大腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 EDNRB / Endothelin B Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
Ca Ski, 人細(xì)胞
EPHA2 Others Human 人 EphA2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人胚腎細(xì)胞-F克隆;293F
HK-2C細(xì)胞,人胚腎上皮細(xì)胞 貂肺上皮細(xì)胞,Mv.1.Lu(NBL-7)細(xì)胞 CL-0365HuTu-80(人十二脂腸腺癌)5×106cells/瓶×2
BE(2)-M17(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
HOB-c 人成骨細(xì)胞(HOB) 500,000cells 人真皮成纖維母細(xì)胞-新生HDF-n
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HVVEC)( 5×105 )
人癌細(xì)胞;MCF7
CM-H096人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
轉(zhuǎn)PYTL基因小鼠支持細(xì)胞;15P-1 小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
RN-s, 大鼠紋狀體神經(jīng)元 Rattus
EPHB4 Others Mouse 小鼠 EPHB4 / HTK 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人碳酸酐酶6(CA-6)免疫試劑盒 Human Carbonic Anhydrase 6,CA-6 ELISA Kit
土壤蔗糖酶(S-SC)測試盒 可見分光光度法 50管/24樣
RatThyroid-Peroxidase,TPOELISA試劑盒大鼠甲狀腺過氧化物酶(TPO)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanLeukemiainhibitoryfactor,LIFELISA試劑盒人白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
humanNoradrenaline,NAELISAKit人*(NA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔糖化血紅蛋白A1c(A1c)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human thrombopoietin (TPO) ELISA Kit 人血小板生成素(TPO)ELISA試劑盒
HumanVaricellazostervirusIgG,VZV-IgGELISAKit 人水痘帶狀皰疹病毒IgG(VZV-IgG)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
humangastriccarcinomaMarkerELISA試劑盒人胃癌標(biāo)志物ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織半*蛋白酶-8(PASE-8)活性比色法定量檢測試劑盒20次
Humannasopharyngealcarcinoma,NPCELISAKit人鼻咽癌(NPC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
酵母蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T免費代測牛生長激素(GH)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
牛上腺素(EPI)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
牛神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
牛乳鐵蛋白(LT)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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