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酵母蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)100T使用說明書

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更新時間:2017-07-10 09:25:41瀏覽次數(shù):113次

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酵母蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)100T使用說明書注意事項
1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
7PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
酵母蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)100T使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
1)取 1060 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
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人支氣管成纖維細胞*培養(yǎng)基 100mL

VEGFC Others Rat 大鼠 VEGFC / VEGF-C (aa 108-223) 人細胞裂解液 (陽性對照)

Y79細胞,人視網(wǎng)膜母細胞瘤 球毛殼霉 小鼠肺腺癌細胞系;LA795

盤羊皮膚細胞;ASHS2

Lncap clone FGC(人前列腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 AMTN / Amelotin 人細胞裂解液 (陽性對照)
兔角膜后基質(zhì)層成纖維細胞;RCBBF

EPHA3 Others Human EphA3 人細胞裂解液 (陽性對照)

臍靜脈內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

JK(Jurkat)細胞,人淋巴細胞瘤細胞 615小鼠網(wǎng)織細胞性白血病瘤株,L615細胞 人結(jié)腸平滑肌細胞裂解物HCSMCL

NCI-H2227(人小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2

Calu-3(人肺腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0062CHO-K1(倉鼠卵巢細胞亞株)5×106cells/瓶×2 正常小鼠Leydig細胞;TM3
人內(nèi)殼細胞(HHirSC)( 5×105 )

人癌細胞;MCF 7B

CL-0447SW 1353(人骨肉瘤細胞)5×106cells/瓶×2

人細胞;Hela 229 [HeLa229] 大鼠主動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL

P815 小鼠肥大細胞癌細胞

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