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更新時間:2017-07-10 09:10:57瀏覽次數(shù):574次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)硼酸鹽緩沖液(BBS,pH8.5-10)500ml使用說明書
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明膠水溶液(2%,無菌)100ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
明膠水溶液(2%,無菌)100ml實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
SNU-5(人胃癌細胞) 5×106cells/瓶×2
SD大鼠脂肪間質(zhì)干細胞 SD rat adipose mesenchymal stem cells
IL12B Others Mouse 小鼠 IL12B / IL-12B 人細胞裂解液 (陽性對照)
BT-325細胞,人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞 空腸彎曲菌 人胚皮膚成纖維細胞;CCC-ESF-1
人腦瘤細胞;SF126
Hep G2(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0442SK-NEP-1(人腎母細胞瘤細胞)5×106cells/瓶×2 人胚胎肌肉組織來源細胞;CCC-HSM-2
小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞;SH3
ERBB3 Others Rhesus 恒河猴 HER3 / ErbB3 人細胞裂解液 (陽性對照)
caski
Hepa1-6-EGFP(CMV-GFP慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)小鼠肝癌細胞 Hepa1-6-EGFP (CMV-GFP lentiviral construct stable strain) of hepatocellular carcinoma cells in mice DMEM+10% FBS
TNFSF11 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 RANKL / OPGL / TNFSF11 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
人主動脈平滑肌細胞 (HASMC)( 5×105 ) HK-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞 Human
ERBB3 Others Rat 大鼠 HER3 / ErbB3 人細胞裂解液 (陽性對照)
人氣管平滑肌細胞cDNAHTSMC cDNA
人表皮黑色素細胞*培養(yǎng)基 100mL
VSMC細胞,大鼠胸主動脈平滑肌細胞 786-0(腎透明細胞腺癌) 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化);PC-12(高分化)
EFNB2 Protein Rat 重組大鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
A2(人腺樣囊性癌細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠黑色素瘤細胞;B16
大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)免疫試劑盒 Human SP1/PSβ1-G ELISA Kit
MouseKidneyinjurymolecule1,Kim-1ELISAKit小鼠腎損傷分子1(Kim-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
IL-1alpha(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克
HumanNetrin-1,Ntn1ELISA試劑盒人軸突生長誘向因子1(Ntn1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanproteinphosphatase1regulatorysubunitA,PPP1R1AELISAKit人蛋白磷酸酶1調(diào)控/抑制因子亞基1A(PPP1R1A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔子S100B蛋白(S-100B)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human heme oxygenase 2 (HO-2) ELISA Kit 人血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA試劑盒
Humangranulocytespecificantinuclearantibody,GS-ANAELISAKit 人粒細胞特異性抗核抗體(GS-ANA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humanfattyacid-bindingprotein,FABPELISA試劑盒人脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織VZV(VARICELLAZOSTER)病毒定性檢測試劑盒20次
HumanNuclearmatrixprotein22,NMP-22ELISAKit人核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
明膠水溶液(2%,無菌)100ml實驗方法人EB病毒IgA(EBvIgA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人D-乳酸(D-LAC)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人D二聚體(D2D)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人DNA結(jié)合蛋白(DBP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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