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1X PBS緩沖液粉劑1L*10實(shí)驗(yàn)方法

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更新時(shí)間:2017-07-10 09:06:43瀏覽次數(shù):403次

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1X PBS緩沖液粉劑1L*10實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類(lèi)推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
1X PBS緩沖液粉劑1L*10實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過(guò)皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
7PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
RTE(大鼠氣管上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

A172人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 A172 human glioblastoma cells DMEM+10% FBS

CD40 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CD40 / TNFRSF5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

CRT細(xì)胞,神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 黑曲霉 人海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞RNAHA-h miRNA5 μg

人肺支氣管癌細(xì)胞;NCI-H1650

HBL-100(人整合SV40基因的上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0361HPAC(人胰腺腺泡上皮癌)5×106cells/瓶×2 水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S2
小腸隱窩上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

ERP27 Others Human ERP27 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

大鼠膀胱上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

HL-60人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞 HL-60 primary human myeloid leukemia cells IMDM(GIBCO)+20%FBS

IGFBP4 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IGFBP4 蛋白 (His 標(biāo)簽)

GH3(大鼠垂體瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠背脊髓神經(jīng)元MN-dsc
IL1RL1 Others Mouse 小鼠 IL1RL1 / ST2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞裂解物HUASMCL

615小鼠滑膜肉瘤瘤株;ZM755

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-C4 III型膠原酶(10mL酶解緩沖液) 1mL

MGC80-3(MGC-803)人胃癌細(xì)胞 Human

CA9 Others Mouse 小鼠 CAR9 / CAIX / CA9 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
大鼠水通道蛋白0(AQP-0)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人鐵蛋白重鏈(FTH)免疫試劑盒 Human Ferritin, Heavy Polypeptide,FTH ELISA Kit

酸性木聚糖酶測(cè)試盒 可見(jiàn)分光光度法 50/24

Ratsolubletumornecrosisfactor-relatedapoptosisinducingligand,sTRAILELISA試劑盒大鼠可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sTRAIL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

HumanKallikrein6,KLK6ELISA試劑盒人*6(KLK6)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

HumanNetrin-4,Ntn4ELISAKit人軸突生長(zhǎng)誘向因子4(Ntn4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔子白介素4(IL-4)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human angiopoietin 1 (ANG-1) ELISA Kit 人血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒

Humananti-cellmembraneDNAantibody,cmDNAELISAKit 人抗細(xì)胞膜DNA抗體(cmDNA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanestrogen,EELISA試劑盒人雌激素(E)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組織SRCN2激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20

Humanornithinecarbamoyltransferase,OCISAKit人*氨基甲酰轉(zhuǎn)移酶(OCT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
1X PBS緩沖液粉劑1L*10實(shí)驗(yàn)方法人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人α1抗胰*(AACT)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人α/β干擾素受體(IFN-α/βR)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

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