當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞培養(yǎng)>> *溶液(0.25%)100ml實(shí)驗(yàn)方法
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聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 儀表網(wǎng)硼酸鹽緩沖液(BBS,pH8.5-10)500ml使用說明書
硼酸鹽緩沖液(BBS,pH8.4)500ml售后服務(wù)
硼酸鹽緩沖液(BBS,pH8.0)500ml實(shí)驗(yàn)方法
DEAE-Dextran細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒200T使用說明書
*溶液(0.25%)100ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對(duì)照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
*溶液(0.25%)100ml實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
RK1(大鼠腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
Saos-2人成骨肉瘤細(xì)胞 Saos-2 human osteosarcoma cells McCOY's 5A+15%FBS
GIF Others Human 人 Gastric intrinsic factor / GIF 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
SF126細(xì)胞,人腦瘤細(xì)胞 表皮葡萄球菌 人腎上皮細(xì)胞總RNAHREpiC tRNA
正常小鼠Sertoli細(xì)胞;TM4
FaDu(人咽鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0299NCI-H460(人肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 兔晶體上皮細(xì)胞永生系;N/N1003A(RLE)
人淋巴成纖維細(xì)胞RNAHLF miRNA5 μg
F13B Others Human 人 F13B / Coagulation factor XIII B chain 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
U251 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞
CL-0426RKO-E6(人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
人星形膠質(zhì)細(xì)胞
人胚肺二倍體細(xì)胞;HL 人小腸粘膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
CDH2 Others Mouse 小鼠 N-Cadherin / CD325 / CDH2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞RNAHUMSC miRNA5 μg
恒河猴腎細(xì)胞;LLC-MK2
RKO-E6細(xì)胞,人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞 人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞,M619細(xì)胞 人耐VP16絨癌細(xì)胞株;JEG-3/VP16
HEC-1-B(人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
ALPL Others Human 人 ALPL / TNAP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
小鼠*S轉(zhuǎn)移酶α4(GSTα4)ELISA試劑盒 ,英文名: GSTα4 ELISA Kit
人銅藍(lán)蛋白(CP/CER)ELISA檢測試劑盒HumanCeruloplasmin,CP/CERELISAKit 96T/48T
大鼠水通道蛋白0(AQP-0)免疫試劑盒 Rat Aquaporin 0,AQP-0 ELISA Kit
英文名稱Ratpregnancyassociatedplasmaprotein-AELISAKit大鼠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
活化*13(FACTORXIIIa)活性熒光定量檢測試劑盒20次
ELISAKitANP人心鈉肽規(guī)格:48T/96T
兔子腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human vascular endothelial cell growth factor B (VEGF-B) ELISA Kit 人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子B(VEGF-B)ELISA試劑盒
Humantrueinsulin,TIELISAKit 人真胰島素(TI)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanErythropoietinreceptor,EPORELISA試劑盒人紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織RSK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
Humanosteonectin,ONELISAKit人骨粘連蛋白(ON)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
*溶液(0.25%)100ml實(shí)驗(yàn)方法人β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人β防御素1(HβD-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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