真菌核蛋白提取試劑盒100T使用說(shuō)明書(shū)使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
產(chǎn)品名稱：真菌核蛋白提取試劑盒100T使用說(shuō)明書(shū)
儲(chǔ)存條件：蛋白酶抑制劑-20℃保存； 蛋白提取液2-8℃保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

真菌核蛋白提取試劑盒是一種基于化學(xué)而非去污劑方法的高產(chǎn)核蛋白提取試劑盒。真菌核蛋白提取試劑盒可以從各種大型真菌（蕈菌）中提取核蛋白，可用于純化蛋白的粗品制備及核蛋白制備。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。該試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高質(zhì)量的蛋白提供了。

真菌核蛋白提取試劑盒100T使用說(shuō)明書(shū)操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō)，也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
真菌核蛋白提取試劑盒100T使用說(shuō)明書(shū)實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
賓鼠尾草Salvia dugesii Tilifodiolide none 126724-95-6 C20H16O5 ≥98%

異牡荊苷Isovitqxin970-2-820mg

莽草酸 Shikimic acid 138-59-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

含量測(cè)定*100893-200601常溫，避光100mg

1,5-二酰奎寧酸;洋薊素，洋薊酸，朝鮮薊酸，朝薊素，菜薊素 1,5-Dicaffeoylinoneic acid 30964-13-7 20mg HPLC≥98% 用
2-耐酚 2- naphthol 50mg/支

香紫蘇醇ThqfrcgrcntPqrillcclcohol212-03-7HPLC≥98%，20mg/vial

羊藿次苷I Icarisid I 56725-99-6 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

供殘留溶劑檢查用本130109-200901常溫，避光1ml

虎杖苷;云杉新苷;白藜蘆醇苷 Polydatin 27208-80-6 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定
南美蟛蜞菊Wedelia trilobata Tetrachyrin none 73483-88-2 C20H28O2 ≥95%

氧化石蒜減Rqdspidqrlilyclkclioxidction7210-4-420mg

絡(luò)緦 Rosin 85026-55-7 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

檢查用左*100872-200801常溫，避光50mg

靈芝酸C6 Ganoderic acid C6 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定
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