當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>蛋白提取/檢測>> 一抗稀釋液(Western)100ml使用說明書
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更新時(shí)間:2017-07-05 11:14:39瀏覽次數(shù):324次
聯(lián)系我時(shí),請告知來自 儀表網(wǎng)總蛋白提取試劑盒(無去垢劑)100T實(shí)驗(yàn)方法
產(chǎn)品名稱:一抗稀釋液(Western)100ml使用說明書
儲(chǔ)存條件:*-20℃保存;短期2-8℃保存。
有效期:六個(gè)月。
產(chǎn)品簡介:
抗體稀釋液適用于蛋白印跡時(shí)抗體的稀釋和配制。本WB抗體稀釋液,添加了多種抗體保護(hù)劑,可以增加抗體的活性和穩(wěn)定性,減少抗體的非特異性結(jié)合,降低非特異性的背景著色,提高試驗(yàn)的特異性和靈敏度。
一抗稀釋液(Western)100ml使用說明書使用注意事項(xiàng)
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時(shí)請采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測時(shí),細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
一抗稀釋液(Western)100ml使用說明書操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請?jiān)?/span>1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對于貼壁細(xì)胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
(1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長,用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
一抗稀釋液(Western)100ml使用說明書實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí),注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時(shí)間不宜過長,否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細(xì)胞;
(3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細(xì)胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
(5)Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
遠(yuǎn)志Radix Polygalae Tenuifoliside A 遠(yuǎn)志糖甙 139726-35-5 C33H40O17 ≥98%
異*Isoqugqnol97-24-120mg
蘿卜流素;萊菔流烷;1-異流青基-4-甲基亞流?;⊥?/span> Sulforaphane 4478-93-7 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
對照品*130517-200401含量測定
異苦參酮 Isokurarinone HPLC≥98% 用于含量測定
28523-86-6 七扶烷標(biāo)準(zhǔn)品(特殊運(yùn)輸) 1ml
冬凌草速Rubescensinep2617-37-220mg
Corchoionoside C (6S,9S)-長壽花糖甙 185414-25-9
*相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品50587-95-6 15mg*相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品
常山乙素;Febrifugine 24159-07-7 20mg 訂購|咨詢
24634-61-5 山梨酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品 1g
野馬追內(nèi)酯AEupatoriumlindleyanumlactoneAHPLC≥98%;20mg/支
Dixy7noperaksine 二輕派利文減 16100-84-8
索他洛爾相關(guān)化合物B標(biāo)準(zhǔn)品50mg索他洛爾相關(guān)化合物B標(biāo)準(zhǔn)品
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